Böcek Puparium Kaldırma: Pupal İnceleme için Bir Yöntem

Overview

Bu makalede, iç pupayı sağlam tutarken bir böceğin puparium'ını çıkarma tekniği açıklanmaktadır ve bu nedenle daha fazla araştırma için uygun. Örnek protokol, Drosophila guttiferaile prosedürü gösterir; ancak, bu teknik diğer Drosophila türleri için geçerlidir.

Protocol

Bu protokol Fukutomi ve ark., Evreleme Pupal Dönemleri ve Drosophila guttiferaKanat Pigmentasyon Ölçümü,J. Vis. Expbir alıntıdır. (2018). 

1. Puparium'un çıkarılması

NOT Drosophila pupaları puparium adı verilen bir yapı ile kaplıdır. Bir Muscomorpha böceği (sinekler) larva kütikülünü yavruda dökmez; bunun yerine, manikleyi apolysis'den sonra sertleştirerek pupanın koruyucu kapağı olan puparium olarak kullanır. Bir puparium içinde bulunan bir pupa, çok yumuşak ve kırılgan olan gerçek bir pupal pikle sahiptir. Apolysis P4 (ii) etrafında gerçekleşmeden önce, epitel ve puparium birbirine bağlanır ve bu nedenle puparium'un hasar görmeden çıkarılması çok zordur. P5'den sonra, puparium'un çıkarılması zahmetlidir, ancak morfolojik gözlem ve pupal aşamaların tanımlanması için yararlıdır. İşlem aşağıdaki gibi gerçekleştirilir.

1. Bir kağıt havlu parçasına çift taraflı bant yapıştırın.
2. Çift taraflı bant ventral tarafına bir pupa yerleştirin (Şekil 1A).
3. Puparium'un ön tarafı ile iç pupa arasındaki boşluğu bulun. Bu boşluğun etrafındaki puparumu uzunlukları kullanarak kavrayın ve çıkarın ve pupa başının ön tarafını açığa çıkarın.
4. Bir ön-arka eksene paralel hareket ettirerek bir ön ucun ucunu yerleştirin. Puparium'un yerel olarak kırılması için toparlamaların ucunu kaldırın. Kırılma pupariumun arka kısmına ulaşana kadar bu eylemi tekrarlayın. Puparium ve pupal bacaklar arasında da bir boşluk oluştuğundan emin olun ve karparumun ventral tarafını kırın ve iç pupanın hasarını en aza indirin (Şekil 1B).
5. Puparumu mümkün olduğunca kırdıktan sonra, ince bir boya fırçası (#5/0)(Şekil 1C)kullanarak pupayı çıkarın.
6. Pupayı ddH₂O ile nemlendirilmiş ve plastik bir Petri kabına (çapı 60 mm x yükseklik 15 mm) yerleştirilmiş bir kağıt mendil parçasına yerleştirin. En kısa sürede fotoğraf çekin çünkü maruz kalan pupa savunmasızdır ve kolayca kurur.
    

Representative Results

Şekil 1. Puparium kaldırma çizimi. (A) Bir pupa ventral tarafı çift taraflı bant parçasının üzerine yerleştirin. Pupariumun ön kısmını çıkarın. (B) Puparumu ventral taraftan gelen asalarla kırın. (C) Puparumu kırdıktan sonra, bir boya fırçası kullanarak pupayı çıkar.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Drosophila guttifera	The Drosophila Species Stock Center at the U.C. San Diego	15130-1971.10	Drosophila guttifera,  a fruit fly species used in this article
NICETACK double sided tape	Nichiban	NW-15SF	Double sided tape,   for removing puparium
Dumont #5 forceps	Fine Science Tools	11252-20	Forceps,  for removing puparium
Van Gogh VISUAL Paint brush	Talens Japan	GWVR-#5/0	Paint brush,  for removing puparium
Stereomicroscope	Olympus	SZX16	Stereomicroscope,  for morphological observation
Digital camera	Olympus	DSE-330-A	Digital camera,  for imaging
Falcon standard tissue culture dish	Corning	353002	Plastic Petri dish (diameter 60 mm x height 15 mm)