कीट Puparium हटाने: पुपल जांच के लिए एक विधि

विकासशील पिल्ला तक पहुंच प्राप्त करने के लिए, प्यूपल एपिथेलियम के क्यूटिकल से अलग होने के बाद या प्यूपल स्टेज पी 5 के बाद प्यूपरियम निकालें। शुरू करने के लिए, अपने वेंट्रल साइड के साथ अक्षुण्ण पिल्ला रखें। आवरण और पिल्ला के सिर के पूर्वकाल छोर के बीच खाली जगह पर पिल्ला को पकड़ने के लिए संदंश का उपयोग करें। फिर, सिर को बेनकाब करने के लिए पिल्ला के पूर्ववर्ती टुकड़े को धीरे से तोड़ें और हटा दें।

वेंट्रल ओरिएंटेशन रखते हुए, पुपरियम के पूर्वकाल-पीछे की धुरी के साथ छोटे ब्रेक बनाने के लिए संदंश का उपयोग करें और यह सुनिश्चित करें कि प्रक्रिया में एक निरंतर अंतर बनता है। सावधान रहें कि नीचे सीधे किसी भी पिल्ला टिश्यू को नुकसान न पहुंचाएं। - इसके बाद एक बार में एक हिस्से के गैप से प्यूपरियम को तोड़ते रहें और इस प्रक्रिया में फटे हुए केसिंग को फैलाते रहें। - बारीक गीले तूलिका का इस्तेमाल करते हुए आगे की जांच के लिए उजागर प्यूपा को उठाएं उदाहरण प्रोटोकॉल में हम देखेंगे कि ड्रोसोफिला गुटटिफेरा के प्यूपरियम को कैसे हटाया जाए और इमेजिंग के लिए पिल्ला तैयार किया जाए।

- प्यूपरियम हटाने की शुरुआत करने के लिए, कागज के तौलिये के एक टुकड़े पर दो तरफा टेप का एक टुकड़ा चिपकाएं। पिल्ला को दो तरफा टेप, वेंट्रल साइड अप पर रखें। puparium और आंतरिक पिल्ला के पूर्वकाल पक्ष के बीच की जगह का पता लगाएं। संदंश का उपयोग करके इस गैप के चारों ओर प्यूपरियम को पकड़ें और हटाएं, और पिल्ला के सिर के पूर्वकाल की ओर बेनकाब करें।

इसे पूर्वकाल-पीछे की धुरी के समानांतर ले जाकर संदंश की नोक डालें। स्थानीय रूप से प्यूपरियम को तोड़ने के लिए संदंश की नोक उठाएं। इस क्रिया को तब तक दोहराएं जब तक कि टूटने का टूट-फूट प्यूपरियम के पीछे के हिस्से तक न पहुंच जाए। सुनिश्चित करें कि प्यूपरियम और प्यूपल पैरों के बीच एक अंतर बनता है, और आंतरिक पिल्ला को नुकसान को कम करते हुए पिल्ला के वेंट्रल साइड को तोड़ दें। जितना संभव हो, पिल्ला को जितना संभव हो उतना तोड़ दें, एक बारीक तूलिका का उपयोग करके पिल्ला को बाहर निकालें। पिल्ला को टिशू पेपर के एक टुकड़े पर रखें जिसे ddH2O के साथ गीला किया गया है और एक प्लास्टिक पेट्री डिश में रखा गया है। तुरंत तस्वीरें लें क्योंकि उजागर पिल्ला कमजोर है और आसानी से सूख जाता है।