स्तन वसा पैड में ऑर्थोटोपिक इंजेक्शन: चूहों में स्तन कैंसर की स्थापना

सबसे पहले, संस्कृति में वांछित स्तन कैंसर सेल लाइन स्थापित करें। ऑपरेशन से एक दिन पहले, माउस के पेट को शेव करें और फर को हटाने और इंगिनल निपल्स को बेनकाब करने के लिए डिपिलेटरी क्रीम का उपयोग करें। ऑपरेशन के दिन, कोशिकाओं को इकट्ठा करें, माउस को एनेस्थेटाइज करें और अंगुली चुटकी के जवाब की कमी की पुष्टि करें। चिमटी का उपयोग करना, एक उत्थान सुरंग बनाने के लिए निप्पल के चारों ओर त्वचा चुटकी।

फिर, एकत्र कोशिकाओं की सिरिंज के साथ, त्वचा को छेदें। सुई सुरंग का पालन करना चाहिए जब तक टिप निप्पल के करीब आता है। धीरे-धीरे सुई टिप को निप्पल के ठीक नीचे, स्तन वसा पैड में ले जाएं। सुई के साथ एक त्वचा तम्बू बनाने के लिए चिमटी निकालें और फिर धीरे-धीरे कोशिकाओं को इंजेक्ट करें।

अंत में, सिरिंज को वापस लें, निप्पल के आसपास के दौर की टक्कर को परेशान न करने का ख्याल रखें। इंजेक्शन कोशिकाओं और बाद में ट्यूमर लूसिफ़ेरेस व्यक्त करते हैं और बायोल्यूमिनेसेंट इमेजिंग का उपयोग करके ट्रैक किया जा सकता है। उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम मुरीन ऑर्थोटोपिक स्तन कैंसर की स्थापना दिखाएगा। ऑपरेशन से पहले दिन, प्राप्तकर्ता माउस को मैन्युअल रूप से नियंत्रित करें और पशु पेट की ओर को चौथे निपल्स के चारों ओर मुंडा जाने के लिए फर तक घुमाएं।

डिपिलेटरी क्रीम की पतली परत के साथ फर को पोंछें। 30 से 60 सेकंड के बाद क्रीम निकालने के लिए आसुत पानी का इस्तेमाल किया। और नरम कागज तौलिए के साथ माउस सूखी। ऑपरेशन के दिन, बर्फ पर एक बाँझ माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में पीबीएस एकाग्रता के मिलीलीटर प्रति 5 कोशिकाओं के लिए एक 2 x 10 के लिए मुरीन स्तन कैंसर सेल निलंबन पतला ।

प्रत्येक इंजेक्शन से पहले, प्रति माउस कोशिकाओं के 50 माइक्रोलीटर के साथ, एक .45 बाय 16 सुई से सुसज्जित एक मिलीलीटर सिरिंज लोड करें। और प्रत्येक बेहोश जानवर में अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करें । जानवरों की आंखों पर मरहम लगाएं, और सिरिंज का पालन करने के लिए एक सुरंग बनाने के लिए पहले माउस के चौथे निप्पल के आसपास त्वचा तम्बू करने के लिए चिमटी का उपयोग करें।

ऊपर की ओर बेवेल के साथ सिरिंज पकड़ो और सुस्पाच से निप्पल से पांच से 10 मिलीलीटर पर त्वचा में प्रवेश, सुरंग के बाद जब तक सुई टिप लगभग निप्पल तक पहुंच जाता है । - पहले निप्पल के चारों ओर त्वचा तम्बू करने के लिए चिमटी का उपयोग सिरिंज का पालन करने के लिए एक सुरंग बनाता है। सुई चिमटी युक्तियों के बीच में प्रवेश किया जाना चाहिए और ऊपर की सवारी करनी चाहिए, बजाय ऊतक में निराशाजनक । सुई टिप को स्तन वसा पैड में तब तक सावधानी से ले जाएं जब तक कि बेजल निप्पल के नीचे न हो जाए।

और त्वचा तम्बू जारी करने के लिए कैंसर की कोशिकाओं के एक धीमी गति से इंजेक्शन की अनुमति है । - प्रविष्टि पर, ध्यान से सुई टिप को स्तन वसा पैड में ले जाएं जब तक कि बेवेल निप्पल के नीचे न हो, और आप कोशिकाओं को सही स्थान पर वितरण सुनिश्चित करने के लिए प्रतिरोध महसूस करते हैं। जब सभी कोशिकाओं को इंजेक्शन दिया गया हो, तो सुई को थोड़ा साइड में घुमाएं और सिरिंज को धीरे-धीरे वापस लें। 10 से 20 सेकंड के लिए सुई घाव के लिए दबाव लागू करने के लिए एक कपास झाड़ू का उपयोग करें, सुनिश्चित करें कि कोई तरल पदार्थ रिसाव है ।

इंजेक्शन निप्पल एक पारदर्शी सफेद फ्लैट क्षेत्र के रूप में दिखाई देना चाहिए, केंद्र में निप्पल के साथ