Ortopedisk injektion i bröstfettdynan: Etablera bröstcancer hos möss

Först etablera den önskade bröstcancercelllinjen i kulturen. Dagen före operationen rakar du musens buk och använder depilatorisk kräm för att ta bort pälsen och exponera de inguinala bröstvårtorna. På dagen för operationen, samla cellerna, bedöva musen och bekräfta brist på svar på tå nypa. Använd pincett, nyp huden runt bröstvårtan för att skapa en upplyft tunnel.

Sedan, med sprutan av uppsamlade celler, genomborra huden. Nålen ska följa tunneln tills spetsen kommer nära bröstvårtan. Flytta försiktigt upp nålspetsen i bröstfettdynan, precis under bröstvårtan. Ta bort pincetten för att bilda ett hudtält med nålen och injicera sedan långsamt cellerna.

Slutligen dra tillbaka sprutan, var försiktig så att du inte stör den runda stöten som omger bröstvårtan. Injicerade celler och efterföljande tumörer uttrycker luciferas och kan spåras med hjälp av bioluminescerande avbildning. I exempelprotokollet kommer vi att visa etableringen av murin ortopisk bröstcancer. Dagen före operationen håller du manuellt fast mottagarmusen och vänder djurmagsidan upp till pälsen som ska rakas runt de fjärde bröstvårtorna.

Torka pälsen med ett tunt lager av depilatorisk grädde. Använd destillerat vatten för att ta bort grädden efter 30 till 60 sekunder. Och torka musen med mjuka pappershanddukar. På dagen för operationen, späd murin bröstcancer cell suspension till en 2 x 10 till 5: e cellerna per milliliter PBS koncentration i en steril microcentrifuge rör på is.

Före varje injektion, ladda en, en milliliter spruta utrustad med en .45 av 16 nål, med 50 mikroliter celler per mus. Och bekräfta brist på svar på tå nypa i varje nedsövt djur. Applicera salva på djurens ögon och använd pincett för att tälta huden runt den fjärde bröstvårtan på den första musen för att skapa en tunnel för sprutan att följa.

Håll sprutan med fasaden uppåt och gå in i huden på fem till 10 milliliter från bröstvårtan, följ tunneln tills nålspetsen nästan når bröstvårtan. - Att använda pincett för att tälta huden runt den första bröstvårtan skapar en tunnel för sprutan att följa. Nålen ska anges mellan pincettspetsarna och ska rida upp, istället för att trycka in i vävnaden. Flytta försiktigt upp nålspetsen i bröstfettdynan tills avfasningen är under bröstvårtan.

Och släpp hudtältet för att möjliggöra en långsam injektion av cancercellerna. - Vid införing, flytta försiktigt nålspetsen upp i bröstfettdynan tills avfasningen är under bröstvårtan och att du känner motstånd för att säkerställa leverans av cellerna till rätt plats. När alla celler har injicerats, vrid nålen något åt sidan och dra långsamt tillbaka sprutan. Använd en bomullspinne för att applicera tryck på nålsåret i 10 till 20 sekunder för att se till att det inte finns någon vätskesippring.

Den injicerade bröstvårtan ska visas som en genomskinlig vit platt sfär, med bröstvårtan i mitten