Orthotopische Injektion in das Brustfettpad: Brustkrebs bei Mäusen

Stellen Sie zunächst die gewünschte Brustkrebszelllinie in der Kultur fest. Am Tag vor der Operation rasieren Sie den Bauch der Maus und verwenden Sie Enthaarungscreme, um das Fell zu entfernen und die Leistenbrustzulagen freizulegen. Sammeln Sie am Tag der Operation die Zellen, befeuchten Sie die Maus und bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion auf Zehenstiche. Mit einer Pinzette kneifen Sie die Haut um die Brustwarze, um einen erhöhten Tunnel zu schaffen.

Dann, mit der Spritze der gesammelten Zellen, durchbohren Sie die Haut. Die Nadel sollte dem Tunnel folgen, bis die Spitze nahe an die Brustwarze kommt. Bewegen Sie die Nadelspitze vorsichtig in das Brustfettpad, direkt unter der Brustwarze. Entfernen Sie die Pinzette, um ein Hautzelt mit der Nadel zu bilden und dann langsam die Zellen zu injizieren.

Ziehen Sie schließlich die Spritze zurück, wobei Sie darauf achten, die runde Beule um die Brustwarze nicht zu stören. Injizierte Zellen und nachfolgende Tumoren drücken Luziferase aus und können mit biolumineszierender Bildgebung nachverfolgt werden. Im Beispielprotokoll zeigen wir die Etablierung von murinem orthotopischem Brustkrebs. Am Tag vor der Operation, halten Sie die Empfängermaus manuell zurück und drehen Sie die Tierbauchseite auf das Fell, um sich um die vierten Brustwarzen rasiert zu werden.

Wischen Sie das Fell mit einer dünnen Schicht Enthaarungscreme ab. Verwendet destilliertes Wasser, um die Creme nach 30 bis 60 Sekunden zu entfernen. Und trocknen Sie die Maus mit weichen Papiertüchern. Verdünnen Sie am Tag der Operation die murine Brustkrebszellsuspension auf 2 x 10 bis 5. Zellen pro Milliliter PBS-Konzentration in einem sterilen Mikrozentrifugenrohr auf Eis.

Laden Sie vor jeder Injektion eine Milliliterspritze mit einer .45 mal 16 Nadel mit 50 Mikroliter Zellen pro Maus. Und bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion auf Zehenkneifung in jedem sedierten Tier. Tragen Sie Salbe auf die Augen der Tiere auf, und verwenden Sie eine Pinzette, um die Haut um die vierte Brustwarze der ersten Maus zu zelten, um einen Tunnel für die Spritze zu schaffen.

Halten Sie die Spritze mit der Abschrägung nach oben und subkutan in die Haut mit fünf bis 10 Millilitern aus der Brustwarze, folgen Sie dem Tunnel, bis die Nadelspitze fast die Brustwarze erreicht. - Mit einer Pinzette, um die Haut um die erste Brustwarze zu zelten, entsteht ein Tunnel für die Spritze zu folgen. Die Nadel sollte zwischen den Pinzettenspitzen eingegeben werden und sollte nach oben reiten, anstatt in das Gewebe zu deprimieren. Bewegen Sie die Nadelspitze vorsichtig in das Brustfettpad, bis sich die Abschrägung unter der Brustwarze befindet.

Und lassen Sie das Hautzelt los, um eine langsame Injektion der Krebszellen zu ermöglichen. - Beim Einsetzen bewegen Sie die Nadelspitze vorsichtig in das Brustfettpad, bis sich die Abschrägung unter der Brustwarze befindet, und dass Sie Widerstand spüren, um die Lieferung der Zellen an die richtige Stelle sicherzustellen. Wenn alle Zellen injiziert wurden, drehen Sie die Nadel leicht zur Seite und ziehen Sie die Spritze langsam zurück. Verwenden Sie einen Wattestäbchen, um Druck auf die Nadelwunde für 10 bis 20 Sekunden anzuwenden, um sicherzustellen, dass es keine Flüssigkeitssickerung gibt.

Die injizierte Brustwarze sollte als transparente weiße flache Kugel erscheinen, mit der Brustwarze in der Mitte