Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
ראשית, להקים את קו התא הרצוי סרטן השד בתרבות. יום לפני הניתוח, לגלח את הבטן של העכבר ולהשתמש קרם depilatory כדי להסיר את הפרווה ולחשוף את הפטמות מפשעתי. ביום הניתוח, לאסוף את התאים, לרוות את העכבר ולאשר חוסר תגובה לצביטת בוהן. באמצעות פינצטה, לצבוט את העור סביב הפטמה כדי ליצור מנהרה מרוממת.
לאחר מכן, עם המזרק של תאים שנאספו, לנקב את העור. המחט צריכה לעקוב אחר המנהרה עד שהקצה מתקרב לפטמה. בעדינות להזיז את קצה המחט לתוך כרית שומן mammary, ממש מתחת לפטמה. הסר את פינצטה כדי ליצור אוהל עור עם המחט ולאחר מכן לאט להזריק את התאים.
לבסוף, לחזור בו המזרק, מקפיד לא להפריע את הבליטה העגולה המקיפה את הפטמה. תאים מוזרקים וגידולים הבאים מבטאים לוציפראז וניתן לעקוב אחריהם באמצעות הדמיה ביולומינסנטית. בפרוטוקול הדוגמה, נראה את הקמתו של סרטן השד האורתוטופי מורין. ביום שלפני הניתוח, לרסן באופן ידני את העכבר המטופל ולהפוך את הצד בטן החיה עד הפרווה להיות מגולח סביב הפטמות הרביעית.
מנגבים את הפרווה בשכבה דקה של קרם דפילטורי. השתמשו במים מזוקקים כדי להסיר את השמנת לאחר 30 עד 60 שניות. ולייבש את העכבר עם מגבות נייר רכות. ביום הניתוח, לדלל את ההשעיה תא סרטן השד מורין 2 x 10 לתאים 5 למיליליטר של ריכוז PBS בצינור microcentrifuge סטרילי על הקרח.
לפני כל זריקה, לטעון אחד, מזרק מיליליטר אחד מצויד .45 על ידי 16 מחט, עם 50 microliters של תאים לכל עכבר. ולאשר חוסר תגובה לצביטת בוהן בכל חיה מסוממת. החל משחה על העיניים בעלי חיים, ולהשתמש פינצטה אוהל העור סביב הפטמה הרביעית של העכבר הראשון כדי ליצור מנהרה עבור המזרק לעקוב.
החזיקו את המזרק עם השיפוע הפונה כלפי מעלה והכנסו את העור בתת עור במהירות של חמישה עד 10 מיליליטר מהפטמה, בעקבות המנהרה עד שטיפ המחט כמעט מגיע לפטמה. - שימוש בפינצטה כדי לאוהל את העור סביב הפטמה הראשונה יוצר מנהרה למזרק לעקוב. יש להזין את המחט בין קצות פינצטה צריך לרכב למעלה, במקום מדכא לתוך הרקמה. בזהירות להעביר את המחט קצה לתוך כרית שומן מומי עד שיפוע הוא מתחת לפטמה.
ולשחרר את אוהל העור כדי לאפשר זריקה איטית של התאים הסרטניים. - עם הכניסה, בזהירות להזיז את קצה המחט לתוך כרית שומן mammary עד שיפוע הוא מתחת לפטמה, וכי אתה מרגיש התנגדות כדי להבטיח מסירה של התאים למיקום הנכון. כאשר כל התאים הוזרקו, להפוך את המחט מעט לצד ולפתות את המזרק לאט. השתמש ספוגית כותנה כדי להפעיל לחץ על פצע המחט במשך 10 עד 20 שניות, כדי לוודא שאין חלחול נוזלים.
הפטמה המוזרקת צריכה להופיע ככדור שטוח לבן שקוף, עם הפטמה במרכז
