Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
İlk olarak, kültürde istenen meme kanseri hücre hattını oluşturun. Ameliyattan bir gün önce, farenin karnını tıraş edin ve kürkü çıkarmak ve kasık meme uçlarını ortaya çıkarmak için depilatory krem kullanın. Operasyon gününde, hücreleri toplayın, fareyi uyuşturun ve parmak sıkışmasına yanıt eksikliğini onaylayın. Cımbız kullanarak, kaldırılmış bir tünel oluşturmak için cildi meme ucunun etrafına sıkıştırın.
Daha sonra, toplanan hücrelerin şırınd ile cildi delin. Uç meme ucuna yaklaşana kadar iğne tüneli takip etmelidir. İğne ucunu meme ucunun hemen altındaki meme yağ yastığına hafifçe hareket ettirin. İğne ile bir cilt çadırı oluşturmak için cımbızı çıkarın ve ardından hücreleri yavaşça enjekte edin.
Son olarak, meme ucunu çevreleyen yuvarlak tümseği rahatsız etmemeye dikkat ederek şırınnayı geri alın. Enjekte edilen hücreler ve sonraki tümörler luciferaz eksprese eder ve biyolüminesan görüntüleme kullanılarak izlenebilir. Örnek protokolde murine ortotopik meme kanserinin kuruluşunu göstereceğiz. Operasyondan bir gün önce, alıcı fareyi manuel olarak kısıtlayın ve hayvan göbeği tarafını dördüncü meme uçlarının etrafında tıraş edilecek kürke doğru çevirin.
Kürkü ince bir depilatory krem tabakası ile silin. Kremayı 30 ila 60 saniye sonra çıkarmak için damıtılmış su kullandı. Ve fareyi yumuşak kağıt havlularla kurulayın. Operasyon günü, murine meme kanseri hücre süspansiyonu, buz üzerinde steril bir mikrosantrifüj tüpünde PBS konsantrasyonunun mililitresi başına 2 x 10 ila 5.
Her enjeksiyondan önce, fare başına 50 mikrolitre hücre ile .45'e 16 iğne ile donatılmış bir mililitre şırınga yükleyin. Ve yatıştırılan her hayvanda parmak sıkışmasına yanıt eksikliğini onaylayın. Hayvanların gözlerine merhem uygulayın ve şırınnanın takip etmesi için bir tünel oluşturmak için ilk farenin dördüncü meme ucunun etrafındaki cilde çadır kurmak için cımbız kullanın.
Şırıngayı eğim yukarı bakacak şekilde tutun ve deri altından deri altı, iğne ucu neredeyse meme ucuna ulaşana kadar tüneli takip ederek meme ucundan beş ila 10 mililitrede cilde girer. - Cımbız kullanarak ilk meme ucunun etrafındaki cilde çadır kurarak şırınnanın takip etmesi için bir tünel oluşturur. İğne cımbız uçları arasına girilmeli ve dokuya baskı yerine yukarı çıkmalıdır. Eğim meme ucunun altına girene kadar iğne ucunu dikkatlice meme yağ yastığına doğru hareket ettirin.
Ve kanser hücrelerinin yavaş bir enjeksiyonuna izin vermek için cilt çadırını serbest bırakın. - Yerleştirildikten sonra, göbek meme ucunun altına girene kadar iğne ucunu dikkatlice meme yağ yastığına doğru hareket ettirebilirsiniz ve hücrelerin doğru yere teslimini sağlamak için direnç hissedersiniz. Tüm hücreler enjekte edildiğinde, iğneyi hafifçe yana çevirin ve şırıngayı yavaşça geri çekin. Sıvı sızıntı olmadığından emin olmak için iğne yarasına 10 ila 20 saniye basınç uygulamak için pamuklu çubuk kullanın.
Enjekte edilen meme ucu, meme ucu ortada olacak şekilde şeffaf beyaz düz bir küre olarak görünmelidir.
