Meme Yağ Pedi içine Ortotopik Enjeksiyon: Farelerde Meme Kanseri Kurma

Overview

Bu yazıda meme kanseri hücrelerini meme yağ pedi içine enjekte ederek kadın farelerde meme kanseri modelinin nasıl oluşturulacağı tartışılmaktadır. Örnek protokol ortotopik enjeksiyonu gösterir.

Protocol

Hayvan deneyleri, Çin Deneysel Hayvan İdaresi Mevzuatının Hükmü ve Genel Tavsiyesi uyarınca yapılmış ve Capital Medical University Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır (Ref no. AEEI-2014-052). 6 ila 8 haftalık dişi Balb/c fareleri kullanıldı.

1. Hücrelerin ve Hayvanların Hazırlanması

1. Ameliyattan bir gün önce, ameliyat bölgesini açığa çıkarmak için dördüncü meme uçlarının etrafındaki saçları tıraş edin.
   1. Farenin serbestçe hareket etmeyeceğinden emin olmak için fareyi arkada sıkıca tutmak için bir el kullanın, karnını operatöre göstermek için fareyi açın ve ardından dördüncü meme uçlarının etrafındaki kürkü elektronik bir tıraş makinesiyle tıraş etmek için başka bir el kullanın.
   2. Meme uçlarının etrafına 30 - 60 sn boyunca ince bir epilasyon kremi tabakası koyun, kremayı damıtılmış suyla temizleyin ve ardından fareyi yumuşak kağıtla kurulayın.
2. Ameliyat günü murine meme kanseri hücrelerini (4T1-luc2) toplayın, hücre numarasını sayın ve steril mikrosantrifüj tüplerinde fosfat tamponlu salin (PBS) hücre yoğunluğunu 2 x 10⁵ hücre/mL olarak ayarlayın ve buzda tutun. Her fare için 1 x 10⁴ hücre/50 μL 1 mL şırınna hazırlanır.

2. Ortopedik Enjeksiyon

1. Farelerin anestezisi
   1. Anesteziye neden olarak. Fareleri kapalı şeffaf bir kaba koyun ve hepsi yatıp uyuyana kadar fareleri yaklaşık 5 dakika uyuşturmak için% 2 izofluran gazını açın.
   2. Anesteziyi koruyun. Fareleri konteynırdan bireysel anestezi maskelerine aktarın, kuruluğu önlemek için gözlerine biraz veteriner merhem koyun, fareleri meme uçları operatöre maruz kalarak supinely tutun ve enjeksiyon yapılana kadar birkaç dakika boyunca izofluran gazı solumaya devam etmelerini bekleyin.
   3. Bir parmak çimdik çekme refleksi eksikliği ile anestezi başarısını onaylayın.
   4. Göz kuruluğunu önlemek için farelerin gözlerine oftalmik merhem uygulayın.
      NOT Kabın büyüklüğüne ve mevcut bireysel anestezi maskelerinin sayısına göre, bir grup fare birlikte uyuşturulabilir ve bireysel anestezi altında tek tek enjekte edilebilir.
2. Enjeksiyonun performansı
   1. Şırınnanın takip etmesi için kaldırılmış bir "tünel" kurmak için dördüncü meme ucunun etrafındaki cildi cımbızla çadır kurmak için bir el kullanın. Diğer el, meme ucuna 5 - 10 mm'de deri altı olarak girmek için şırıngayı iğne yukarı doğru çevrilmiş olarak tutmak için kullanın; daha sonra, iğne ucu meme ucuna yaklaşana kadar "tüneli" takip edin, iğne ucu meme ucunun altına gelene kadar iğne ucunu dikkatlice meme yağ yastığına doğru hareket ettirin, cımbızları atın ve hücreleri yavaşça enjekte edin.
   2. İğneyi biraz çevirin ve şırıngayı yavaşça geri çekin; sıvı sızıntı olmadığından emin olmak için iğne yarasını 10 - 20 s bastırmak için pamuklu çubuk kullanın.
   3. Başarılı bir enjeksiyonu onaylamak için dördüncü meme ucuna dikkat edin: merkez gözlemlenebildiği gibi meme ucu ile bir beyaz şeffaf düz küre (Şekil 1).
3. Farelerin iyileşmesine ve çok hızlı hareket etmesine izin vermemek için fareleri bir dakika daha uyuşturun, bu da enjeksiyon yarasının açılmasına ve tümör hücrelerinin dışarı sızmasına neden olur.

Şekil 1: Dişi Balb/c farelerinin meme yağ yastığına ortotopik enjeksiyon öncesi ve sonrası resimler. Ameliyat yapıldı ve fareler izofluran anestezisi altındayken fotoğraflar çekildi. A, enjeksiyondan önce, B, enjeksiyondansonra.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
anesthesia machine	Midmark Corporation, Dayton, OH, USA	Matrx VMS	anesthesia
isoflurane	Hebei yipin chemical reagents  company	O21400	anesthesia
1 mL syringe	Becton, Dickinson and  Company	A257	cell injection
hair removal cream	Veet	-	hair removal cream
Carbomer Eye Gel	Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH	-	ophthalmic ointment