Drosophila Verkeringsconditionering: een methode om leren en geheugen in vliegen te testen

-Isoleer eerst enkele naïeve, of ongemateerde, Drosophila melanogastor mannetjes. Voeg vervolgens, om de mannetjes te conditioneren, een vrouwtje toe dat al gedekt is, en daarom niet ontvankelijk is voor verkering. Het mannetje vertoont typische verkeringsgedragingen zoals zich naar haar oriënteren, haar volgen, haar met een voorpoot tikken en zijn vleugel uitbreiden en trillen om het verkeringslied te produceren. Hij kan ook proberen te likken en te paren. Ongeacht de inspanningen, het vrouwtje blijft niet ontvankelijk.

Om het geheugen van de man te testen, laat hem rusten en stel hem vervolgens bloot aan een andere gedekte vrouw. De getrainde man zal niet proberen deze vlieg het hof te maken omdat hij de herinnering aan eerdere afwijzing behoudt. In het voorbeeldprotocol zullen we zien hoe vliegen worden behandeld tijdens de training- en testfasen van een verkeringsconditioneringstest voor korte- en langetermijngeheugenbeoordeling.

- Begin met het verdoven van alle volwassenen van de vier dagen oude paringsvijlen. Scheid de geslachten en breng enkele voorgemateerde vrouwtjes over in elk van de 12 putten van een rij van een woonblok. Verwijder vervolgens, met behulp van een aspirator en geen anesthesie, de naïeve mannetjes uit hun thuisputten en breng ze over in de putten met de voorgemateerde vrouwtjes. Herhaal dit proces in de tweede rij om nog 12 paren op te zetten.

Om het leren of het kortetermijngeheugen te testen, voert u deze opstelling bij zonsopgang uit en laat u de trainingsperiode een uur duren. Om het langetermijngeheugen te testen, stelt u de paren vier uur voor de subjectieve dageraad in en laat u de training acht uur duren.

- Om leren en geheugen vast te stellen, is het belangrijk dat de mannetjes niet copuleren, dus controleer regelmatig de paren tijdens de trainingsperiode, om ervoor te zorgen dat de mannetjes worden afgewezen.

Wanneer de trainingsperiode voorbij is, verwijdert u de mannetjes voorzichtig uit de putten met behulp van een aspirator, niet met koolstofdioxide-anesthesie. Laad de mannetjes in een nieuw woonblok. Test voor het leerexperiment onmiddellijk de mannetjes na de training, zonder rustperiode. Voor het kortetermijngeheugenexperiment, geef de mannetjes een uur rust voordat ze aan de testfase beginnen. Voor het langetermijngeheugenexperiment rust de mannetjes tot de volgende subjectieve dageraad.

Om je voor te bereiden op de testfase van het experiment, verdoof je voorgeprogrammeerde vrouwtjes en breng je ze over naar een nieuw normaal voedsel. Laat de vliegen minstens een uur herstellen van de anesthesie. Bereid vervolgens de testopstelling voor. Zorg ervoor dat de videorecorders klaar zijn om activiteit op te nemen in de verkeringsarena's.

Om de test te starten, gebruik zachte aspiratie om een testmannetje over te brengen van het woonblok naar de verkeringsarena met de verdelers gesloten. Verplaats de ingangsgaten tussen de arena's totdat alle 18 arena's zijn geladen met enkele mannetjes. Breng vervolgens, met dezelfde techniek, individuele voorgemateerde vrouwtjes over naar elk van de 18 arena's, maar naar de andere kant van de verdelers. Draai nu voorzichtig de verkeringsarena om en plaats deze onder de videocamera met de putopeningen naar beneden naar het witte bankoppervlak. Wanneer het experiment voorbij is, verwijdert u de vliegen uit de arena's met behulp van een vacuüm en ventileert u de verkeringskamers gedurende ten minste 10 minuten voordat ze opnieuw worden gebruikt.