Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- På et positivt ladet mikroskopsklie, fest to dekselslipper med nok avstand mellom dem til å skape et rom for Drosophila-hjernene som skal monteres. Under stereomikroskopet pipetterer du hjernen i monteringsmedium inn i det rommet. Den negative ladningen av vevet vil hjelpe hjernen til å holde seg til den positive ladningen på overflaten av lysbildet.
Fjern overflødig monteringsmedium for å muliggjøre presis posisjonering av hjernen på lysbildet i et rutenettmønster med antennelobene vendt opp, og bro de to dekselskliene ved å feste et tredje deksel som glir over for å dekke hjernen.
For å fylle ut hulrommet, plasser monteringsmediet en dråpe om gangen i kanten av hulrommet, og la det spre seg ved kapillær bevegelse slik at det ikke forstyrrer hjernen.
Forsegle hulrommet med neglelakk, og oppbevar ved negative 20 grader Celsius i mørket for å bevare fluorescensen av farget vev.
I eksempelprotokollen vil vi montere Drosophila-hjerner for konferokal avbildning av immundempende nevroner.
- For å montere hjernen, bygg en brosklie. Plasser to bunndeksler som glir omtrent en centimeter fra hverandre på et positivt ladet lysbilde. Forsikre deg om at den positivt ladede siden er med forsiden opp. Fest deretter dekselet til gliden med neglepolering, og la poleringen tørke helt før du fortsetter.
Deretter plasserer du lysbildet under et stereomikroskop og pipettehjerner i middels inn i rommet mellom dekselskliene.
Deretter aspirerer du det ekstra monteringsmediet fra lysbildet, og er forsiktig med å unngå hjernen. Deretter transporterer du bort overflødige monteringsmedier. Dette vil tillate hjernen å bli plassert mer presist. Nå, ved hjelp av tang, orienter hjernen inn i et rutenettmønster med antennelobene vendt opp.
Legg deretter et deksel over hjernen, og bruk neglelakk for å forsegle kantene på toppdekselslippet som er festet til bunndekselskliene.
Nå, last midthulen med ferske monteringsmedier drop-wise, slik at mediet kan trekkes under dekselet slip ved kapillær virkning. Når hulrommet er fylt, forsegle det helt ved hjelp av klar neglelakk.
