Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Em um slide de microscópio carregado positivamente, adere a dois deslizamentos de cobertura com distância suficiente entre eles para criar um espaço para que os cérebros de Drosophila sejam montados. Sob o microscópio estéreo, pipeta os cérebros em meio de montagem naquele espaço.
Remova o excesso de montagem do meio para permitir um posicionamento preciso dos cérebros na lâmina em um padrão de grade com os lóbulos da antena voltados para cima, em seguida, ponte os dois deslizamentos de cobertura, aderindo um terceiro deslizamento de cobertura através para cobrir os cérebros.
Para preencher a cavidade, coloque a montagem média uma gota de cada vez na borda da cavidade, e permita que ela se espalhe pelo movimento capilar para que não perturbe os cérebros.
Sele a cavidade com esmalte e guarde a 20 graus Celsius negativos no escuro para preservar a fluorescência de tecidos manchados.
No protocolo de exemplo, vamos montar cérebros de Drosophila para imagens confocal de neurônios imunossuídos.
- Para montar o cérebro, construa um deslizamento de ponte. A posição de duas faixas de base desliza aproximadamente um centímetro de distância em um slide carregado positivamente. Certifique-se de que o lado carregado positivamente está voltado para cima. Em seguida, adere a tampa desliza para o slide com polimento de unhas, e deixe o polonês secar completamente antes de prosseguir.
Em seguida, coloque o slide sob um microscópio estéreo e cérebros de pipeta em meio ao espaço entre os deslizamentos de cobertura. Certifique-se de ajustar a iluminação para melhorar a visualização do cérebro.
Em seguida, aspire a mídia de montagem extra do slide, tomando cuidado para evitar os cérebros. Em seguida, afastar o excesso de mídia restante.
Em seguida, coloque um deslizamento de cobertura sobre o cérebro e use polimento de unhas para selar as bordas do deslizamento da tampa superior que estão anexadas aos deslizamentos de cobertura base.
Agora, carregue a cavidade central com uma nova mídia de montagem em termos de gota, permitindo que a mídia seja desenhada sob o deslizamento da tampa por ação capilar.
