Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Para começar, fixe uma pupa dorsal de mosca-das-frutas, ou para trás, de lado para cima. Remova o operculum ou a extremidade anterior da pupa para expor a cabeça do animal. Continue a abrir a pupa cortando e descascando o invólucro. Uma vez liberado, cubra a pupa dissecada com PBS para evitar a dessecação. Faça um corte limpo e transversal através do tórax e remova a parte posterior da carcaça.
Para expor o complexo olho-cérebro, que inclui as duas retinas ligadas aos lobos ópticos, comece a rasgar o epitélio da borda aberta do tórax e continue a abrir a cápsula da cabeça gradualmente.
No protocolo de exemplo, veremos uma demonstração de uma dissecção pupal olho-cérebro usada para isolar tecido para várias análises a jusante.
- Depois de colocar a pupa de Drosophila em um prato de dissecação preto, coloque um pedaço fresco de fita dupla face no prato de dissecação longe da pupae e use um par de fórceps para colocar cuidadosamente o lado dorsal pupae sobre a fita.
Coloque o prato sob um microscópio estéreo e use fórceps para remover o operculum de cada pupa. Use uma tesoura de microdisseção para cortar cada caixa pupal, permitindo que ele seja aberto para revelar a cabeça, o tórax e o segmento abdominal anterior, e fixar as bordas da caixa pupal à fita de dupla face.
Fure o abdômen de cada pupa com fórceps afiados e remova a pupa de sua caixa pupal. Coloque a pupa no prato de dissecção longe da fita, e cubra a pupa com 400 microliters de PBS gelado. Use fórceps para agarrar cada um pelo abdômen, e use a tesoura de microdisseção para fazer uma incisão transversal limpa através do tórax, cortando a pupa ao meio.
Usando dois pares de fórceps finos, segure as bordas cortadas de cada epitélio tórax e gradualmente rasgue o tórax e a cápsula da cabeça, expondo o complexo olho-cérebro no tecido adiposo circundante.
