Ensayo local de sonda de calor: Un método para evaluar la nocicepción de altas temperaturas en larvas de Drosophila

- Preparar larvas de Drosophila para un ensayo de sonda de calor, recoger animales de la etapa de desarrollo deseada y transferir larvas individuales a una placa de ensayo con una fina película de agua.

Las larvas de Drosophila detectan estímulos térmicos nocivos a través de neuronas sensoriales multidendriticas en su epidermis conocidas como nociceptores.

Ajuste la sonda de calor a una temperatura que supere este umbral sensorial, y haga que los nociceptores se disparen. Presione suavemente la punta de la sonda contra la larva para aplicar calor. La larva responderá a la temperatura nociva con comportamientos termo-nociceptivos, retirándose de la sonda.

En el protocolo de ejemplo, veremos una demostración de un ensayo de sonda de calor localizado en las larvas de Drosophila de principios del tercio.

- En primer lugar, preajuste la temperatura de la sonda térmica al punto de ajuste deseado. Utilice un pincel o fórceps para transferir suavemente una larva individual a una plataforma plana, asegurándose de que la lava esté cubierta por una fina película de agua.

- Con el fin de minimizar la variación en la presión, así como para garantizar la correcta ubicación y ángulo de la sonda de calor, la práctica hace perfecto.

- Presione suavemente la punta de la sonda contra la larva en el segmento A4, aplicando presión de luz con la punta en aproximadamente un ángulo de 45 grados entre la sonda y la superficie de la larva. La presión debe causar una ligera sangría en la superficie de la larva, y por lo general será suficiente para prevenir la locomoción.

Las larvas que responden suelen mostrar primero un comportamiento preliminar de elevación de la cabeza y la cola, seguido del comportamiento de abstinencia de rodar al menos 360 grados. Una vez iniciado el comportamiento de abstinencia, libere el contacto con la sonda y registre la latencia o el tiempo que se tarda en retirarse.