Encyclopedia of Experiments: Biology
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-对于此解剖,使用两个微管:一个开口的宽度与鸡蛋大致相同,另一个宽度是鸡蛋的两倍宽,以及一系列在井中组织起来的解决方案,以促进它们之间的快速转移。
首先,将成年草药放入卵盐溶液中,这种溶液在骨质上是平衡的,以防止胚胎爆裂。将蠕虫切成两半以释放发育中的胚胎。
然后,确定双细胞阶段胚胎。这些细胞是由受精卵的分裂形成的胚胎。使用具有较大开口的微皮带将胚胎转移到次氯酸盐溶液漂白剂中,这将开始分解保护性蛋壳。
仅仅40到55秒后,将胚胎转移到谢尔顿的生长介质,即SGM。在SGM的两口井中短暂清洗每个胚胎,去除漂白剂的所有痕迹,然后放入第三口井中。
现在,使用较小的微皮反复移液胚胎提供机械力,以去除蛋壳和暴露爆破仪。轻轻地继续移液胚胎分离单个胚胎细胞。 在下列协议中,我们将看到这种技术在起作用。
- 用右手和左手将微胶囊的两端保持在 10 微升的容量中。将微胶囊拉向两端以施加张力,并将毛细骨的中心移过燃烧器,使两个手拉毛细毛。
在解剖显微镜下,用钳子修剪手拉毛细管的尖端,使两个尖端开口大小分别约为C.elegans胚胎用于胚胎移植和卵壳去除的短轴长度的2倍和1倍。
将拉毛细管连接到口腔管道装置中。派珀特45 微升蛋盐溶液连接到多井滑梯的井上。
将5至10个成年C.elegans放入井中,为了获得早期的C.elegans胚胎,将成人切成碎片,将两根针放在C.elegans身体的左右两侧,并将针头滑过对方。
将45微升次氯酸盐溶液输送到含蛋盐溶液井旁的井上,将45微升谢尔顿生长介质输送到随后的三口井中。将单细胞阶段和早期双细胞阶段胚胎通过大尺寸开口的口腔移液将单细胞阶段和早期双细胞阶段胚胎转移到叶绿素溶液中,等待40至55秒。
用谢尔顿的生长介质将胚胎移植到接下来的三口井中,在前两口井中各用1到2秒的时间清洗。使用手绘毛细管,用较小的开口,小心地重复用管道将胚胎移除蛋壳。
之后,连续用手绘毛细管将双细胞阶段胚胎胚胎胚胎分离。
- 去除蛋壳后,尽量减少上下管道胚胎的力,以防止爆裂。