Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Om te beginnen, kweek de embryo's in 3 Petrischaaltjes. De eerste is een controleplaat die Hank's oplossing bevat-- een uitgebalanceerde zoutoplossing. De tweede en derde plaat hebben Hank's oplossing met een potentieel neurotoxische verbinding in verschillende concentraties.
De neurotoxische verbinding in de blootstellingsoplossing dringt door passieve diffusie het uitwendige membraan van de embryo's binnen en verandert de processen van het zenuwstelsel, zoals aandacht, coördinatie en spieractiviteit. Zodra de embryo's zich ontwikkelen tot larven van de juiste leeftijd, brengt u elke larve over in een individuele put van een 48-putplaat. Houd de behandelingsconditie voor elk dier bij.
Breng de putplaat over op een opnameplatform en trek het deksel naar beneden. Laat de larven 10 minuten acclimatiseren. Stel afwisselende cycli van lichte en donkere perioden in met behulp van de software.
Zebravislarven vertonen normaal gesproken meer beweging in het donker en minder beweging in het licht. Registreer de totale afstand die de larven van de controle en de blootstellingsgroepen in elke periode afleggen. Als de verbinding neurotoxisch is, vertonen larven nog meer beweging in het donker en in het licht dan controledieren.
In het volgende protocol zullen we gedragstests uitvoeren op de zebravislarven die zijn blootgesteld aan neurotoxische verbindingen.
- Stel ten minste 2 uur voor het uitvoeren van een experiment de kamertemperatuur in op 28 graden Celsius en voeg 800 microliter belichtingsoplossing toe aan elke put van een 48 well microplate. Gebruik vervolgens een pipet van 1 milliliter met een aangepaste tip om één larve in 200 microliter belichtingsoplossing over te brengen naar elke put van de microplaat, ter voorbereiding op een motorbewegings- en padhoekexperiment.
Wanneer alle parameters zijn ingesteld, schakelt u de verlichting in de testruimte uit en laat u de larven gedurende 10 minuten in het systeem acclimatiseren. Klik aan het einde van de acclimatisatieperiode op Experimenteren en uitvoeren en maak de map waarin de experimentele bestanden moeten worden opgeslagen. Voer vervolgens de naam van het resultaat in en klik op Achtergrond en Start.
Klik aan het einde van het experiment op Experiment en Stop. Breng vervolgens de 48 putmicroplaat terug naar de lichtincubator voor latere experimenten.
