Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Para começar, cultivar os embriões em 3 pratos de Petri. O primeiro é uma placa de controle que contém a solução de Hank- uma solução de sal equilibrada.
O composto neurotóxico na solução de exposição penetra na membrana externa dos embriões por difusão passiva e altera os processos do sistema nervoso, como atenção, coordenação e atividade muscular. Uma vez que os embriões se desenvolvem em larvas da idade apropriada, transfira cada larva para um poço individual de uma placa de 48 poços.
Transfira a placa do poço para uma plataforma de gravação e puxe a tampa. Deixe as larvas se aclimatarem por 10 minutos. Defina ciclos alternados de períodos claros e escuros usando o software.
As larvas de zebrafish normalmente apresentam mais movimento no escuro e menos movimento na luz. Registre a distância total percorrida pelas larvas do controle e pelos grupos de exposição em cada período. Se o composto for neurotóxico, as larvas mostram ainda mais movimento no escuro e na luz do que os animais de controle.
No protocolo a seguir, realizaremos testes comportamentais nas larvas de zebrafish expostas a compostos neurotóxicos.
- Pelo menos 2 horas antes de realizar um experimento, ajuste a temperatura ambiente para 28 graus Celsius e adicione 800 microliters de solução de exposição a cada poço de uma microplaca de 48 poços. Em seguida, use uma pipeta de 1 mililitro com uma ponta modificada para transferir uma larva em 200 microliters de solução de exposição para cada poço da microplaca, em preparação para um experimento de locomoção e ângulo de caminho.
Quando todos os parâmetros tiverem sido definidos, desligue a iluminação na sala de teste e deixe as larvas se aclimatarem no sistema por 10 minutos. No final do período de aclimatação, clique em Experimentar e Executar e crie a pasta na qual os arquivos experimentais devem ser salvos. Em seguida, digite o nome do resultado e clique em Plano de Fundo e Iniciar.
No final do experimento, clique em Experimentar e Parar. Em seguida, devolva a microplaca de 48 poços de volta à incubadora de luz para experimentos subsequentes.
