Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Для начала выращиваем эмбрионы в 3 чашках Петри. Первая - это контрольная пластина, которая содержит раствор Хэнка - сбалансированный солевой раствор. Вторая и третья пластины имеют раствор Хэнка с потенциально нейротоксическим соединением в разных концентрациях.
Нейротоксическое соединение в растворе экспозиции проникает во внешнюю мембрану эмбрионов путем пассивной диффузии и изменяет процессы нервной системы, такие как внимание, координация и мышечная активность. Как только эмбрионы превращаются в личинок соответствующего возраста, перенесите каждую личинку в индивидуальный колодец 48 хорошо пластины. Следите за состоянием лечения для каждого животного.
Перенесите пластину на записывающую платформу и стяните вниз крышку. Пусть личинки акклиматизируются в течение 10 минут. Установите чередующиеся циклы светлых и темных периодов с помощью программного обеспечения.
Личинки зебры обычно проявляют больше движения в темноте и меньше движения в свете. Запись общего расстояния, пройденного личинками контроля и групп воздействия в каждом периоде. Если соединение нейротоксическое, личинки показывают еще больше движения в темноте и в свете, чем контроль животных.
В следующем протоколе мы будем проводить поведенческие тесты на личинках зебры, подвергшихся воздействию нейротоксических соединений.
- По крайней мере за 2 часа до проведения эксперимента установите комнатную температуру до 28 градусов по Цельсию и добавьте 800 микролитров раствора экспозиции к каждой колодец из 48 микропластиров. Затем используйте 1 миллилитровую пипетку с измененным наконечником для передачи одной личинки в 200 микролитров раствора экспозиции к каждой колодец микроплэта, в рамках подготовки к локомотиву и эксперименту под углом пути.
Когда все параметры будут установлены, выключите освещение в испытательном зале и позвольте личинкам акклиматизироваться в системе в течение 10 минут. В конце периода акклиматизации щелкните Experiment and Execute и создайте папку, в которой будут сохранены экспериментальные файлы. Затем введите имя результата и нажмите Background and Start.
В конце эксперимента нажмите Experiment and Stop., затем верните микроплюс 48 хорошо обратно в световой инкубатор для последующих экспериментов.
