꼬리 정맥 주입: 마우스 모형에 있는 전이성 연구를 위한 암세포를 관리하는 방법

먼저 트립신을 부착된 유방암 세포가 함유된 페트리 접시에 추가하여 표면에서 분리합니다. 트립신의 동작을 중지하는 세럼이 포함 된 매체를 추가합니다. 세포 현탁액을 원내 튜브로 옮기고 원심분리기를 펠릿 세포로 옮기다.

상체를 버리고 인산염 완충식식염으로 세포를 다시 중단합니다. 세포 대사를 늦추기 위해 튜브를 얼음에 놓습니다. Luer 잠금 주사기에 필요한 양의 세포를 포함하는 이 셀 서스펜션을 로드하고 바늘을 고정시합니다.

꼬리가 바깥에 있는 설치류 제지에 마우스를 놓습니다. 따뜻한 물에 꼬리를 담그고 정맥을 넓게 합니다. 측면측면에는 두 개의 정맥과 꼬리의 복부 쪽에 동맥이 있습니다. 알코올로 꼬리를 닦고 바늘을 삽입하고 세포 현탁액을 주입하십시오.

일단 혈류량에, 주입된 암세포는 폐와 같은 기관으로 침입하고, 증식합니다. 천천히 바늘을 제거하고 주입 부위에 멸균 거즈를 사용하여 출혈을 멈추도록 압력을 가합니다. 마우스를 케이지에 반환하고 완전한 복구를 보장합니다. 다음 프로토콜에서, 우리는 유방암 전이와 식민지를 정량화하기 위하여 마우스 모형으로 표지된 전이성 암세포의 주입을 보여줍니다.

미디어를 흡인하고 1X PBS로 셀 플레이트를 헹구세요. 15센티미터 플레이트당 5밀리리터의 트립신으로 세포를 2~5분 동안 트립시니징하고 모든 세포를 원추형 튜브로 옮기습니다. 트립신을 담금질하기에 충분한 완전한 성장 매체로 조직 배양 접시에서 남은 세포를 씻으십시오. 같은 원물 튜브에 세척을 추가합니다. 자동화된 셀 카운터를 사용하여 셀을 계산하여 총 셀 수를 결정합니다.

다음으로, 세포를 122회 G로 3분간 원심분리하고 수퍼나티를 흡인시합니다. 원하는 농도에서 1X PBS에서 세포를 다시 중단합니다. 여기서, 25,000개의 세포는 PBS의 100마이크로리터에서 각 마우스로 주입되므로, 재중단된 세포는 밀리리터당 250,000개의 세포이다. 세포 현탁액을 주입 할 때까지 얼음에 보관하십시오.

동물 시설에서 후드에서 작업, 부드럽게,하지만 철저하게 튜브를 반전하거나 균일하게 다시 중단되도록 1 밀리리터 주사기를 사용하여 세포를 혼합. 이제 셀 서스펜션으로 1 밀리리터 루어 잠금 주사기를 적재하고 과도한 기포를 추방합니다. 1/2 인치, 30 게이지 바늘을 주사기에 베벨을 올려 놓고 기포를 추방합니다.

마우스를 설치류 제지제에 부드럽게 배치합니다. 측면 꼬리 정맥을 보이고 넓혀야합니다. 그렇지 않은 경우 꼬리의 베이스를 부드럽게 꼬집어 따뜻한 수돗물에 꼬리를 담그고 정맥을 팽창시다. 꼬리를 청소하기 위해 알코올 닦아사용합니다. 그런 다음 바늘을 꼬리 정맥에 삽입하고, 측면을 위로 구부리고, 세포 현탁액100 마이크로리터를 주입한다. 바늘이 정맥에 제대로 삽입되면 약간 앞뒤로 쉽게 밀어야하며 플런저를 밀어 넣을 때 저항이 없어야합니다.

성공적인 주사는 또한 주입 다음 몇 초 동안 정맥의 파란색이 흰색으로 변하는 플러시를 초래해야합니다. 천천히 바늘을 제거하고 멸균 거즈를 사용하여 주사 부위에 압력을 가하여 출혈을 막습니다. 마우스를 케이지에 반환하고 전체 복구를 보장하기 위해 15 분 동안 모니터링하십시오.