En biologie moléculaire, la ligature fait référence au raccrochement de deux fragments d’ADN à travers la formation d’une liaison phosphodiester. Un enzyme connu sous le nom de ligase catalyse la réaction de ligature. Dans la cellule, les ligases réparent les simples ou doubles brins cassés, ceci a lieu lors de la réplication de l’ADN. Au laboratoire, l’ADN ligase est utilisé pendant le clonage moléculaire pour relier les fragments d’ADN d’inserts avec les vecteurs – porteurs de molécules d’ADN qui vont répliquer les fragments cibles dans les organismes hôtes.

Cette vidéo fournit une introduction à la ligature d’ADN. Le principe de base de ligature est décrit ainsi que la procédure étape par étape de mise en place d’une réaction de ligature généralisée. Les aspects critiques des réactions de ligature sont discutés, tels que comment la longueur d’un surplomb à extrémité cohésive affecte la température de réaction et comment le rapport d’insert et de vecteur d’ADN doit être ajusté pour éviter l’auto-ligature. Les outils moléculaires qui aident les ligatures tels que le fragment de Klenow et la phosphatase alcaline de crevette (SAP) sont mentionnés. Les utilisations tels que les ligatures de proximité et l’ajout de lieurs aux fragments pour le séquençage sont aussi présentés.