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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
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JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
DNA Ligation Reactions
  • 00:00Overview
  • 00:28DNA Ligation: Basic Principles
  • 03:04Setting up a Ligation
  • 05:40Applications
  • 07:08Summary

Reacciones de ligación de ADN

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Overview

En biología molecular, la ligadura se refiere a la Unión de dos fragmentos de ADN mediante la formación de un enlace fosfodiéster. Una enzima conocida como una ligasa cataliza la reacción de ligadura. En la célula, ligasas reparación de roturas del filamento solo y doble que se producen durante la replicación del ADN. En el laboratorio, ligase de la DNA se utiliza durante la clonación molecular para unir fragmentos de ADN de insertos con vectores – las moléculas de ADN del portador que se reproducen fragmentos del destino en los organismos de acogida.

Este video proporciona una introducción a la ligadura de la DNA. El principio básico de la ligadura se describe así como un procedimiento paso a paso para configurar una reacción generalizada de la ligadura. Se discuten los aspectos más importantes de las reacciones de ligadura, como cómo la longitud de una proyección final pegajoso afecta la temperatura de reacción y cómo la proporción de ADN coloca a vector debe ser adaptados para prevenir uno mismo-ligadura. Herramientas moleculares que ayudan con trompas como la fosfatasa alcalina fragmento Klenow y camarón (SAP) se mencionan, y aplicaciones como trompas de proximidad y la adición de conectores a los fragmentos de la secuencia también se presentan.

Procedure

La ligadura puede definirse como el acto de Unión y en biología, que el término se refiere a una reacción enzimática que se une a dos biomoléculas con un enlace covalente. Este video describe la aplicación de ligadura de ADN en la investigación de la biología molecular. En la célula, ligasas del ADN son enzimas que identifican y sellan roturas en el ADN, catalizando la formación de enlaces fosfodiéster entre los grupos hidroxilo 3′ y 5′-fosfato de la espina dorsal d…

Disclosures

No conflicts of interest declared.

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. DNA Ligation Reactions. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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