Mer än hälften av proteiner är små proteiner (molekylmassa <200 kDa) som utmanar både elektronmikroskop imaging och tredimensionella rekonstruktioner. Optimerad negativ färgning är en robust och hög genomströmning protokoll för att med hög kontrast och relativt hög upplösning (~ 1 nm) bilder av små asymmetriska proteiner eller komplex under olika fysiologiska förhållanden.