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CRISPR/Cas9-중재 유전자 녹아웃 셀 분할에 대 한 Integrase 불충분 한 Lentiviral 벡터의 생산을 위한 프로토콜
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JoVE Journal Genetics
A Protocol for the Production of Integrase-deficient Lentiviral Vectors for CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockout in Dividing Cells
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CRISPR/Cas9-중재 유전자 녹아웃 셀 분할에 대 한 Integrase 불충분 한 Lentiviral 벡터의 생산을 위한 프로토콜

DOI:
10.3791/56915-v

•

10:42 min

•

December 12, 2017

•

,
1Duke Viral Vector Core, Department of Neurobiology,Duke University School of Medicine

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:52Transfecting of HEK-293T Cells Using Calcium Phosphate
  • 02:19Harvesting Virus
  • 02:50Concentration of Viral Particles by Ultracentrifugation
  • 05:11Esimating of Viral Titers Using p24-enzyme-linked Immunosorbent Assay
  • 07:31Counting GFP-positive Cells
  • 08:25Results: Production and Validation of the Knockout-efficiency of Integrase-deficient Lentiviral-CRSPER/Cas9 Vector
  • 09:57Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

우리는 셀에 CRISPR/Cas9를 제공 하기 위한 차량으로 integrase 불충분 한 lentiviral 벡터 (IDLVs)의 생산 전략을 설명 합니다. 셀에서 편집 하는 신속 하 고 강력한 유전자를 중재 하는 능력, IDLVs 안전 제시와 유전자 배달에 대 한 동등 하 게 효과적인 벡터 플랫폼 integrase 유능한 벡터에 비해.

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Keywords: Integrase-deficient Lentiviral VectorsCRISPR/Cas9Gene EditingHEK-293T CellsTransfectionSucrose GradientUltracentrifugation

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