Journal
/
Genetics
/
Ett protokoll för produktionen av integras-brist Lentiviral vektorer för CRISPR/Cas9-medierad gen Knockout i delande celler
JoVE Journal
Genetics
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Genetics
A Protocol for the Production of Integrase-deficient Lentiviral Vectors for CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockout in Dividing Cells
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Ett protokoll för produktionen av integras-brist Lentiviral vektorer för CRISPR/Cas9-medierad gen Knockout i delande celler

DOI:
10.3791/56915-v

•

10:42 min

•

December 12, 2017

•

,
1Duke Viral Vector Core, Department of Neurobiology,Duke University School of Medicine

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:52Transfecting of HEK-293T Cells Using Calcium Phosphate
  • 02:19Harvesting Virus
  • 02:50Concentration of Viral Particles by Ultracentrifugation
  • 05:11Esimating of Viral Titers Using p24-enzyme-linked Immunosorbent Assay
  • 07:31Counting GFP-positive Cells
  • 08:25Results: Production and Validation of the Knockout-efficiency of Integrase-deficient Lentiviral-CRSPER/Cas9 Vector
  • 09:57Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Vi beskriver strategin produktion av integras-brist lentiviral vektorer (IDLVs) som fordon för att leverera CRISPR/Cas9 till celler. Med en förmåga att förmedla snabb och robust gen redigering i celler, IDLVs presentera en säkrare och lika effektiv vektor plattform för gen leverans jämfört med integras-behöriga vektorer.

Tags

Integrase-deficient Lentiviral VectorsCRISPR/Cas9Gene EditingHEK-293T CellsTransfectionSucrose GradientUltracentrifugation

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Med hjälp av en fluorescerande PCR-kapillärgelelektrofores Technique att genotypa CRISPR / Cas9-medierad Knockout mutanter i en hög kapacitet Format

Urval-beroende och oberoende generering av CRISPR / Cas9-medierade genknockouts i däggdjursceller

Ett universellt protokoll för storskaliga gärna biblioteket produktion från någon DNA-källa

CRISPR/Cas9-medierad riktade Integration In Vivo som använder en homologi-medierad slutet att gå-baserad strategi

Effektiv produktion och identifiering av CRISPR/Cas9-genererade gen Knockouts i det modellsystem Danio rerio

Produktion och rening av baculoviridae för genterapi ansökan

Högeffektiva gen störningar av murina och mänskliga hematopoetiska stamceller av CRISPR/Cas9

Lentiviral medieras produktion av transgena möss: en enkel och mycket effektiv metod för direkta studier av grundarna

Hög genomströmning identifiering av reglerande gensekvenser som använder nästa generations sekvensering av cirkulär kromosom konformation fånga (4C-seq)

In vivo tillämpning av systemet med fjärrkontroll för Manipulation av endogena genuttrycket

Read Article