Medicine
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Um modelo de Glaucoma induzido por sutura Circumlimbal em ratos e camundongos
Chapters
Summary October 5th, 2018
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Hipertensão ocular crônica é induzida pela aplicação de uma sutura de circumlimbal em ratos e camundongos, levando à deterioração funcional e estrutural das células ganglionares da retina consistentes com glaucoma.
Transcript
Esta abordagem fornece uma maneira reprodutível e minimamente invasiva de elevar o IOP por longos períodos de tempo. Isso nos ajudará a entender melhor o glaucoma. Uma vantagem dessa técnica é que a elevação do IOP é facilmente reversível, permitindo que os pesquisadores investiguem as habilidades dos olhos para se recuperar da elevação da pressão crônica.
Uma demonstração visual deste método é fundamental, pois suturar e amarrar um nó de tensão são difíceis de aprender lendo um manuscrito sozinho. Para auxiliar bem, recomendamos que uma nova técnica, pratique a sutura sob microscópio. Comece esfregando o rato acordado em um pedaço de pano macio para acalmar o animal.
Segure suavemente o tronco em uma mão, com os animais de volta apoiados contra o peito dos investigadores, e exponha a cabeça e o pescoço. Use a outra mão para trazer o tonômetro rebote perto do olho de rato, de modo que a ponta da sonda interocular esteja a aproximadamente dois a três milímetros de distância, e perpendicular ao ápice da córnea. Espere alguns segundos para o rato se acalmar, em seguida, pressione o botão de medição uma vez.
Observe a parte superior da sonda IOP bata suavemente no ápice da córnea uma vez, e ouça o bipe do tonômetro rebote. Após um ou dois segundos, repita a medição. Faça um total de 10 medições para obter um valor IOP médio para o ponto de tempo.
Reinicie o tonômetro após a quinta leitura. Uma vez que você esteja monitorando, meça IOP na mesma hora do dia. E em condições de iluminação de consistência, para minimizar a variação devido a um ciclo IOP.
Cubra o roedor anestesiado com uma cortina cirúrgica estéril fenestrada, expondo o olho a ser suturado. Em seguida, depois de garantir um plano cirúrgico de anestesia, use 7-10 sutura de nylon para realizar uma sutura de bolsa-corda na conjuntiva bulbar ao redor do globo, tecendo a sutura 7-10 paralela e 2 mililitros posteriores ao limbus. Tome cuidado para não penetrar na esclera dele.
Uma súbita dilatação pupilar durante o procedimento cirúrgico indica que a esclera provavelmente foi penetrada. Ancore a sutura nos ratos conjuntiva usando cinco a seis pontos de ancoragem. Evite a compressão direta nas principais veias epiesclerais, roscando a sutura sob a conjuntiva no cruzamento dessas veias.
Aperte a sutura de cordas de bolsa amarrando um nó de deslizamento. Em seguida, amarre um nó simples e mantenha-o solto. Para evitar um pico de IOP pós-cirúrgico excessivamente alto, tenha um assistente medir o IOP.
Se o IOP for considerado muito alto, ajuste o slipknot liberando parcialmente a tensão em uma extremidade da sutura. Após o IOP desejado de 30 a 60 milímetros de mercúrio é alcançado, amarre o segundo nó mantendo uma força de puxar contínua na extremidade dessa sutura. Após o segundo nó ser apertado, corte as extremidades da sutura para minimizar qualquer sensação de corpo estranho.
Monitore o animal durante a recuperação da anestesia geral. Ao trabalhar com ratos, coloque uma sutura de nylon 10-0 em um milímetro posterior ao limbus. Use de quatro a cinco pontos de ancoragem para ancorar a sutura na conjuntiva do mouse.
Em seguida, aperte a sutura de corda de bolsa amarrando um slipknot. Depois de amarrar um nó simples e mantê-lo solto, meça o IOP com a ajuda de um assistente. Para sustentar iOP e visão de longo prazo, é importante garantir que o nó esteja apertado o suficiente ao prender a sutura de corda da bolsa.
Aqui demonstramos como amarrar um nó significativo em um olho modelo, a fim de gerar tensão suficiente. Após o IOP desejado ser alcançado, amarre o segundo nó, mantendo uma força de puxar contínua naquela extremidade da sutura. Neste gráfico, os olhos hipertensos oculares individuais são representados por símbolos vermelhos e controlam os olhos por símbolos cinzentos.
A sutura circunlimbala aumentou a pressão intraocular por 8 semanas em ratos. O IOP permaneceu inalterado nos olhos de controle contralateral. A resposta positiva do limiar scotopic, reflete a saúde das células gânglios da retina, e foi encontrada reduzida nos olhos hipertensivos oculares indicados pela linha vermelha;em relação aos olhos de controle indicados pela linha preta.
Houve também uma pequena redução do ERG a e b-wave, o que provavelmente refletirá uma leve disfunção dos receptores fotográficos e células bipolares, respectivamente. O maior déficit, no entanto, foi encontrado na resposta positiva do limiar escocópico. Confirmando a disfunção celular de gânglio preferencial após a leve elevação do IOP crônico.
Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de apertar o slipknot com compressão interior adequada. A razão mais comum para que o IOP não suba a longo prazo, é que o nó se solta ao longo do tempo. Após este procedimento, todas as modificações como a remoção da sutura, para normalizar a pressão intraocular, podem ser realizadas para responder a perguntas adicionais, como se as células gânglios regulares podem se recuperar da elevação do IOP.
E quais são os mecanismos que envolvem essa recuperação?
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