Genetics
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식물 성장 및 Extremophyte Schrenkiella parvula 의 꽃-딥 변환 Agrobacterium 중재
Summary January 7th, 2019
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Agrobacterium 중재 변환 꽃 딥 메서드를 사용 하 여 성공적으로 extremophyte 모델 Schrenkiella parvula의 안정적인 유전자 변형 라인을 만드는 데 사용할 수 있습니다. 선물이 프로토콜에서 애기 thaliana, 다른 성장 습관을 고려 하 고는 extremophyte의 생리 적 특성에 대 한 수정.
Transcript
이 방법은 슈렌키엘라 파르불라의 재현 가능한 변형 프로토콜로 식물 비교 및 기능 적 젠닝 분야의 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있으며, 특히 식물 적응을 거친 환경에 대한 연구로 조사합니다. 이 기술은 다중 이온 염응응에 적응된 극성에 대한 슈렌키엘라 파르불라의 일상적인 기능을 조사할 수 있게 해줍니다. 그것은 또한 그것의 가까운 친척, 어머니 부모 아리비도프시스 탈리아나를 보는 비교 연구를 가능하게 합니다.
슈렌키엘라 파르불라와 아리비도프시스 탈리아나를 비교하면 슈렌키엘라 파르부엘라의 독특한 적응을 가능하게 하는 유전자 조절 및 기능의 차이에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 아라비도시스 탈리아나의 변형 프로토콜은 이미 잘 확립되어 있습니다. 이 방법은 이제 트랜스제닉 슈렌키엘라 파르불라 식물을 사용하여 비교 연구를 가능하게합니다.
일반적으로이 방법에 새로운 연구원은 꽃 습관과 식물 딥뿐만 아니라 진정한 변압제의 선택을 사용하여 효과적인 변환을 만드는 Schrenkiella Parvula 식물의 잎 형태 때문에 투쟁할 것입니다. 시작하려면 젖은 이쑤시개를 사용하여 약 20~25개의 S.Parvula 씨앗을 젖은 토양으로 옮긴다. 그런 다음 5 ~7 일 동안 섭씨 4도에서 씨앗을 계층화합니다.
계층화 후, 7 ~10 일 동안 성장 챔버에 씨앗을 반환합니다. 모든 묘목이 발아되면, 네 모서리와 냄비의 중앙에 하나의 묘목을 둡니다. 식물이 꽃을 피우기 전까지 성장 실에서 8~10주 동안 식물을 재배합니다.
변환 당일 텍스트 프로토콜에 따라 S.Parvula 식물을 선택합니다. 집게와 작은 가위를 사용하여 이미 실리크로 발전하고있는 수분된 꽃집을 제거하십시오. 식물이 준비된 후, 농균 침투 용액을 준비하십시오.
그 후, 20초 동안 S.Parvula 의 침투 용액을 아그로박테리움 침투 용액으로 담급드세요. 여기에 이미 개발 된 실리크가 변환전에 제거되는 한 변환에 사용할 수있는 식물의 초기 단계이며, 더 많은 꽃을 가진 오래된 식물을 사용할 수 있습니다. 변환 후, 식물을 커버하기 위해 돔깨끗한 트레이에 수평으로 담근 꽃을 놓습니다.
그런 다음 1 ~2 일 동안 어두운 성장실에 식물을 놓습니다. 식물을 똑바로 세워 서 성장실로 옮기면 됩니다. 다음 주에 담근 꽃집을 모니터링합니다.
첫 번째 꽃 딥 후 10 일, S.Parvula 식물은 새로운 꽃과 실리크를 생산 계속됩니다. 새로 떠오르는 꽃무늬를 더욱 변화시키기 위해 두 번째 꽃 딥을 연주할 수 있습니다. 씨앗이 성숙 할 때까지 식물을 성장하고, 약 21 주 씨앗을 수확.
건조제로 채워진 밀폐 용기에 실온에서 2 ~ 3 주 동안 씨앗을 건조. 텍스트 프로토콜에 따라 T 씨앗을 심습니다. 처음 2~3개의 진정한 잎이 생길 때까지 식물을 재배합니다.
제초제 저항에 대한 첫 번째 선택을 수행하려면 글루포시늄 제초제를 희석하고 모종에 스프레이하십시오. 하룻밤 사이에 돔으로 묘목을 덮습니다. 트레이를 다시 성장실로 넣고 돔을 제거합니다.
대부분의 묘목이 제초제에 의해 선택될 때까지 기다립니다. 두 번째 선택을 시작하려면 BASTA 용액으로 3~4회 분사한 후 살아남은 식물을 식별합니다. 2 ~ 3 주 동안 식물을 재배 한 후 각 식물에서 가장 큰 성숙한 잎을 선택하십시오.
다음으로 잎 표면을 손가락으로 부드럽게 문지르면 왁스 층을 제거합니다. 그런 다음 잎에 희석 된 BASTA 용액한 방울을 놓습니다. BASTA 솔루션으로 처리된 잎을 최대 1주일 동안 시스팅할 징후를 모니터링합니다.
마지막으로 추가 분석을 위해 BASTA 낙하의 영향을 받지 않는 잎이 있는 식물을 선택합니다. 이 프로토콜에서 S.Parvula는 꽃 딥 방법을 사용하여 아그로박테리움으로 변형되었습니다. 농균 감염은 일부 꽃의 낙태 결과.
그러나 S.Parvula 식물은 첫 번째 꽃 담그기 후 새로운 꽃을 계속 생산하고, 다시 변환 할 수 있습니다. BASTA 스프레이 및 드롭 테스트를 사용하여 진정한 양성 변압제를 정확하게 식별할 수 있습니다. PCR 확인을 사용하여 테스트된 샘플 수를 줄일 수 있습니다.
이 방법은 아라비도시스 탈리아나의 변형과 유사하지만, 슈렌키엘라 파르불라의 성장과 형태에 대한 차이를 기억하는 것이 중요합니다. 이러한 차이를 반영하도록 프로토콜을 수정하는 것은 성공적인 변환에 매우 중요합니다. 이 기술은 연구원이 극단적 인 모델, 슈렌키엘라 파르불라에서 여러 염응 적응으로 이어지는 게놈 변이의 진화를 탐구하는 데 도움이 될 수 있습니다.
이 기술을 아랄도시스 탈리아나의 기능에 대한 정보와 결합, 슈렌키엘라 파르불라와 밀접하게 관련된 또 다른 공장. 연구원은 이 두 종 사이 2개의 명백한 구조물인 규칙 그리고 기능에 있는 변이를 공부할 수 있습니다. 변환 과정에서 모든 아그로박테리움 침투 용액을 자동 복제 가능한 용기에 포함하는 것이 중요합니다.
장갑, 매크로 파이펫 팁 및 종이 타월을 포함하여 아그로박테리움과 접촉한 모든 재료를 살균하고 안전하게 폐기하십시오.
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