Neuroscience
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Lezyonlar karakterize ve küçük hayvan beyinlerinde elektrot bulmak için bir mikro-CT-esaslı Yöntem
Chapters
Summary November 8th, 2018
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Bu makalede küçük hayvan beyin mikro-CT görüntüleme, hangi lezyonlar sayılabilir ve tüm beyin bağlamında yüksek hassasiyetle yer alan elektrotlar hazırlamak için basit bir yöntem.
Transcript
Bu yöntem, lezyonları doğrulamak ve elektrot konumlarını bulmak için daha basit, daha az hataya yatkın ve daha nicel bir yöntem sağlayarak nöroloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, kesite gerek kalmadan tüm beyindeki lezyonların ve elektrot bölgelerinin doğrulanmasına olanak sağlamasıdır. Son ürün beynin dijital bir 3D hacmi ve birden fazla beyin paralel olarak işlenebilir.
Bu yöntem sıçanda gösterilecek olsa da, fareler ve zebra ispinozları gibi diğer organizmalara da uygulanabilir. Bazı adımlar en iyi sonuçları sağlamak için özel bakım gerektirdiğinden, genellikle, bu yönteme yeni bireyler mücadele edecektir. Başlamak için, 50 mililitrelik konik tüp profüzyon çözeltisi bir çıkarılan beyin yerleştirin.
Dört santigrat derecede hafif sallayarak iki ila üç gün boyunca örnek saklayın. Osmiyum suda seyreltilmiş değil, bir tampon olduğundan emin olun. Su hafif bir deterjan olarak hareket edecek, osmiyum doku içine derin nüfuz sağlayan olmasıdır.
Çift distile suda %2 osmiyum tetroksit 50 mililitre hazırlayın. Sonra yeni bir 50 mililitre konik tüp beyin yerleştirin ve osmiyum tetroksit çözeltisi ekleyin. Tüpü kapatın ve sızıntıları önlemek için parafin filmi ile kapatın.
İki hafta boyunca hafifçe sallayarak dört derece santigrat de mühürlü tüp saklayın. Tüpün yatay olarak yerleştirildiğinden emin olun. Beyin çok kalın ve difüzyon ile seyahat etmek için uzun bir yol.
Tüpü yatay olarak yerleştirmek osmiyumun dokuya daha derinden girmesini sağlayacaktır. Numune iki hafta boyunca incubates sonra, numuneden tüm bağlanmamış osmiyum tetroksit kaldırmak için beş kez çift distile su ile yıkayın. Daha sonra, dört santigrat derece 30 dakika boyunca çift distile su ile örnek yıkayın.
Numuneyi susuz leştirmek için çift distile suyu dört seyreltme etanol ile değiştirin. Rekarn infiltrasyon işlemine başlamak için, numuneyi üç aseton ve üç aseton rezorn seyreltme yoluyla hareket ettirin, ardından infiltrasyon işlemine devam etmek için numuneyi oda sıcaklığında %100 rezorna batırın. Bundan sonra, tek kullanımlık bir kalıp için örnek aktarın.
Numuneyi oda sıcaklığında dört saat boyunca taze %100 reşin ile aşılayın. Numuneyi vakumlu fırında 15 dakika 45 derecede gazdan arındırın. Sonra 60 santigrat derece 48 saat boyunca bir fırında örnek tedavi.
Son olarak, numune kürleme tamamlandığında, tek kullanımlık kalıbı soyup Micro-CT makinesiyle tarayabilirsiniz. Geleneksel kesitlerde, beynin oryantasyonu önceden belirlenmelidir. Bu Mikro-CT yöntemi kullanılarak, örnek beynin dijital hacmi üç boyutlu olarak manipüle edilebilir ve neredeyse herhangi bir yönde dilimlenebilir.
Hazırlanan sıçan beyninin taramalı elektron mikroskobu, dokunun Mikro-BT görüntüleme amacıyla önemli ölçüde zarar görmediğini doğrulamaktadır. Bir zebra ispinoz beyin de hazırlandı ve diğer küçük hayvan beyinleri üzerinde bu yöntemin yarar test etmek için bu protokole göre tarandı. Bu teknik beyinde yüzey lezyonları bulmak için kullanılabilir, yanı sıra beyin içinde derin lezyonlar.
Bu teknik aynı zamanda yerinde tek tetrodların konumuna, elektrolitik lezyonlara, elektrot izlerine, yerinde tetrode dizilerine ve silikon probların yerinde ki konumuna da uygulanabilir. Bu işlemi denerken, beynin yeterince uzun süre kuluçkaya yatmasını ve yeterince ajitasyon la kuluçkaya yatmasını unutmamak önemlidir. Bu işlemin ardından, farklı beyin bölgelerinin farklı davranışlarda oynadığı rol hakkında ek soruları cevaplamak için optogenetik ve iki foton görüntüleme gibi diğer yöntemler de uygulanmaktadır.
Bu teknik, nöroloji alanında araştırmacılar daha iyi sıçanlar, fareler, ötücü kuşlar ve diğer küçük hayvanlarda beyin ve davranış arasındaki yapı-fonksiyon ilişkilerini keşfetmek için izin verebilir. Osmiyum ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve eldiven takmak ve vakum kaputunda çalışmak gibi önlemlerin her zaman bu işlemi gerçekleştirirken alınması gerektiğini unutmayın.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
