3D enkelt-molekyle lokalisering mikroskopi udnyttes til at sonde de rumlige positioner og bevægelses forløbskurver af fluorescently mærkede proteiner i levende bakterieceller. Den forsøgs-og dataanalyse protokol, der er beskrevet heri, afgør den udbredte åbne systemer opførsel af cytosolisk proteiner baseret på poolede enkelt molekyle forløbskurver.