3D одномолекулярная микроскопия локализации используется для зондирования пространственных положений и траекторий движения флуоресцентно обозначенных белков в живых бактериальных клетках. Экспериментальный протокол анализа данных, описанный в данном документе, определяет распространенное диффузное поведение цитосолильных белков на основе объединенных одномолекулярных траекторий.