Biology
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Indução de insuficiência ventricular direita por constrição da artéria pulmonar e avaliação da função ventricular direita em camundongos
Chapters
Summary May 13th, 2019
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Aqui, nós fornecemos uma aproximação útil para estudar o mecanismo da falha ventricular direita. Uma aproximação mais conveniente e mais eficiente à constrição da artéria pulmonaa é estabelecida usando instrumentos cirúrgicos feitos inhouse. Além disso, são fornecidos métodos para avaliar a qualidade dessa abordagem por ecocardiografia e cateterismo.
Transcript
Este método fornece uma técnica útil para estudar os mecanismos de falha ventricular direita. As principais vantagens dessa técnica são economizar tempo e aumentar a taxa de sucesso da cirurgia. Esta técnica pode nos ajudar a imitar a hipertrofia do coração direito e a falha em humanos por constrição da artéria pulmonar para criar uma sobrecarga de pressão pulmonate.
Este método pode ser aplicado à técnica de constrição aórtica transversal e pode fornecer insights sobre complicações pós transplante de coração, e estudos de doenças cardíacas congênitas. O procedimento será demonstrado por Xiaoxia Huang, uma técnica do meu laboratório. Antes de iniciar o procedimento, passe um pedaço de sutura de seda trançada 6-0 através de uma agulha calibre 25 desmontada de uma seringa de um mililitro.
Use fórceps hemostáticos para dobrar a agulha 90 graus. Em seguida, dobre uma agulha calibre 22 120 graus. Depois de confirmar a falta de resposta ao aperto do dedo do pé, coloque um rato anestesiado na posição supina em uma almofada de aquecimento de 37 graus Celsius, e fixe os incisivos com uma sutura.
Fixar os membros com fita adesiva e usar creme depilatório para remover o cabelo do pescoço para o processo xiphoide. Desinfetar a pele exposta com iodo sequencial e lenços 75% de etanol, e usar alicates pontiagudos para extrair ligeiramente a língua. Eleve a mandíbula com uma espátula feita sob medida para expor o glottis, e use uma fonte de luz fria para direcionar a inserção cuidadosa de uma cânula traqueia feita sob medida através do glottis.
Ajuste os parâmetros do mini ventilador e ajuste a taxa respiratória para 150 respirações por minuto, e um volume de maré de 300 microliters. Em seguida, conecte o tubo e o ventilador para confirmar que a cânula foi corretamente inserida antes de fixar a cânula com fita adesiva. Para abrir o peito, faça uma incisão de pele de aproximadamente 10 milímetros paralela à segunda costela.
Use uma tesoura e pinças de cotovelo para separar os músculos peitoral maiores e menores acima do segundo espaço intercostal. Conte as costelas do ângulo severo para identificar o segundo espaço intercostal e use uma tesoura para abrir este espaço. Em seguida, separe sem rodeios e timo até que o tronco pulmonar seja visível.
Para restringir a artéria pulmonar, use a pinça do cotovelo para separar sem rodeios o tronco pulmonar e a aorta ascendente. Use a agulha de trava de 90 graus para passar a sutura através do tecido conjuntivo entre o tronco pulmonar e a aorta ascendente. Coloque a agulha de 120 graus no tronco pulmonar.
Use a sutura de seda trançada 6-0 para ligar a agulha de preenchimento ao tronco pulmonar, removendo a agulha de preenchimento imediatamente após o preenchimento do conus pulmonar. Corte as duas extremidades das suturas e continue observando o preenchimento do conus pulmonar para avaliar se uma constrição está presente. Em seguida, avalie novamente o reflexo do pedal do animal para garantir o sucesso da ligadura e feche o peito e a pele com uma sutura de nylon 5-0.
Pelo menos três dias após a cirurgia, aplique gel de ultrassom no peito do animal constrito da artéria pulmonar. Coloque uma sonda de 30 mega-hertz no peito em uma posição anti-horário de 30 graus relativa à linha parasternal esquerda, enquanto orienta o entalhe na direção caudal. Regular os eixos Y e X sob o modo B até que a válvula mitral, a aorta e a câmara ventrículo esquerda estejam claramente visíveis.
Gire a sonda de 30 a 40 graus em seu eixo Y em direção ao peito. Regular os eixos Y e X até que o conus pulmonar esteja claramente visível e coloque o cursor na ponta dos folhetos da válvula pulmonar para medir a velocidade de fluxo máximo. Selecione a cor e o PW e coloque a linha tracejada de onda pulsada paralelamente à direção do fluxo sanguíneo.
Ajuste o lado esquerdo da almofada para que seja mais alto que o lado direito, mantendo a sonda orientada 30 graus para o horizonte ao longo da linha axilar interior direita, com o entalhe apontado na direção caudal. Regular os eixos X e Y até que o ventrículo direito esteja claramente visível. Em seguida, clique no modo M duas vezes para mostrar a linha indicadora.
Oito semanas após a cirurgia, entubar o camundongo como demonstrado, e fazer uma incisão bilateral de 1,5 centímetro abaixo do processo xifoide através do diafragma para abrir a cavidade torácica. Corte as costelas para expor o coração, e use uma agulha de calibre 23 para penetrar na parede livre do ventrículo direito. Pressione o ponto de perfuração suavemente com um cotonete para parar qualquer sangramento, e use a ponta do cateter para perfurar o ventrículo através da ferida.
Quando a curva estiver estável, regulamente a ponta do cateter em direção ao trato de saída do ventrículo direito. Clique em selecionar e analisar para registrar a pressão arterial sistólica e a pressão diastólica do ventrículo direito, taxa máxima de aumento, constante de tempo exponencial de relaxamento e frequência cardíaca por 10 minutos. Em seguida, transfira o cateter do coração para um recipiente de soro fisiológico.
Em comparação com o grupo Sham, uma velocidade de pico mais alta, maior gradiente de pressão e maior espessura da parede do ventrículo direito são obtidos a partir da visão do eixo longo parasternal às oito semanas após a cirurgia no grupo de Constrição da Artéria Pulmonar. Além disso, a função sistólica do ventrículo direito é significativamente reduzida no grupo de Constrição da Artéria Pulmonar, em comparação com o grupo Sham, oito semanas após a cirurgia. O grupo de Constrição da Artéria Pulmonar tem maior pressão ventrículo direito na sístole e diastole, e o índice de contralução é reduzido em comparação com o do grupo Sham.
O ventrículo direito Tau e a taxa máxima de aumento também são maiores no grupo de Constrição da Artéria Pulmonar do que no grupo Sham. Demonstrando que a disfunção ventrículo direita é induzida em camundongos após oito semanas de banda arterial pulmonar. Testes hemodinâmicos invasivos no ventrículo direito, revelam que a frequência cardíaca permanece estável antes e depois do monitoramento do cateter.
Em comparação com o grupo Sham, as dimensões do ventrículo direito são significativamente aumentadas, e o peso do ventrículo direito é maior. Além disso, o exame histológico mostra que a fibrose cardíaca na área coberta por cardiomiócitos são maiores no grupo de Constrição da Artéria Pulmonar do que no grupo Sham. A parte mais importante do procedimento é garantir que a artéria pulmonar seja separada correta e completamente.
Para evitar uma separação incorreta, o ponto de separação deve estar próximo ao ramo da artéria pulmonar, onde o tecido conjuntivo entre as artérias estará mais solto. Com este método, fornecemos uma abordagem mais conveniente e eficiente para induzir hipertrofia ventricular direita. Geralmente, o procedimento cirúrgico e as abordagens de avaliação são muito seguros.
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