/
/
Het combineren van niet-vermindert SDS-pagina analyse en chemische crosslinking om multimeric complexen te ontdekken die door disulfide verbindingen in zoogdiercellen in cultuur worden gestabiliseerd
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:04Title
- 00:34Harvesting Cells After Blocking Free Cysteine Residues Using Iodoacetamide
- 02:02Extraction of Protein and Sample Preparation
- 03:13In Vivo Formaldehyde Cross-linking of Endogenous Proteins in U-2 OS Cells
- 04:30Fractionation of Nuclei
- 06:11Extraction of Protein and Sample Preparation
- 06:51SDS-PAGE Analysis
- 07:53Results: Analyzing Multimeric Complexes Using a Two-step Method of Non-reducing SDS-PAGE Analysis and Formaldehyde Cross-linking
- 09:04Conclusion
Disulfide verbanden zijn al lang bekend om de structuur van veel eiwitten te stabiliseren. Een eenvoudige methode om multimeric complexen te analyseren die door deze aaneenschakelingen worden gestabiliseerd is door niet-vermindert SDS-pagina analyse. Hier wordt deze methode geïllustreerd door het analyseren van de nucleaire isovorm van dUTPase van het menselijk bot Osteosarcoom Cell line U-2 OS.
