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Combinaison de l’analyse SDS-PAGE non réductrice et de la réticulation chimique pour détecter les complexes multimères stabilisés par des liaisons disulfures dans les cellules de mammifères dans la culture
JoVE Journal
Developmental Biology
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JoVE Journal Developmental Biology
Combining Non-reducing SDS-PAGE Analysis and Chemical Crosslinking to Detect Multimeric Complexes Stabilized by Disulfide Linkages in Mammalian Cells in Culture
DOI:

09:37 min

May 02, 2019

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Chapters

  • 00:04Title
  • 00:34Harvesting Cells After Blocking Free Cysteine Residues Using Iodoacetamide
  • 02:02Extraction of Protein and Sample Preparation
  • 03:13In Vivo Formaldehyde Cross-linking of Endogenous Proteins in U-2 OS Cells
  • 04:30Fractionation of Nuclei
  • 06:11Extraction of Protein and Sample Preparation
  • 06:51SDS-PAGE Analysis
  • 07:53Results: Analyzing Multimeric Complexes Using a Two-step Method of Non-reducing SDS-PAGE Analysis and Formaldehyde Cross-linking
  • 09:04Conclusion

Summary

Automatic Translation

Les liaisons disulfures ont longtemps été connues pour stabiliser la structure de nombreuses protéines. Une méthode simple pour analyser les complexes multimères stabilisés par ces liaisons est une analyse SDS-PAGE non réductrice. Ici, cette méthode est illustrée par l’analyse de l’isoforme nucléaire de dUTPase de la lignée cellulaire ostéosarcome osseuse humaine U-2 OS.

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