Bioengineering
This content is Open Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Ядро / оболочка Печать Scaffolds для ткани инженерных трубчатых структур
Summary September 27th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Здесь представлена простая в использовании, ядро / оболочка, трехмерная биопечать настройки для одноступенчатой изготовления полых лесов, подходит для тканевой инженерии сосудистых и других трубчатых структур.
Transcript
Изготовление трубчатых структур является перспективным подходом к тканевой инженерии сосудистых сетей, которая остается одной из основных проблем при выращивании толстых тканей в пробирке. Основным преимуществом метода ядра/оболочки является простое производство полых нитей леса в один шаг, сокращая время изготовления и потенциально позволяя прямой печати с клетками. Подготовка гидрогеля с соответствующими вязко-вещественные свойства, и поддержание непрерывного сбалансированного потока основных / оболочки материалов имеет решающее значение для 3D-печати стабильных лесов.
Для начала заполните стерильный шприц 5 мл свежеприготовленным гидрогелем. Заполните второй шприц 5 мл, оснащенный 27 калибровочных тупых конца иглы, со свежеприготовленным перекрестным раствором. Сопло ядра/оболочки.
Вставьте G27 тупой конец иглы в качестве основного компонента и закрепить иглу с помощью винта. Внутренняя игла должна выступать около 1 мм от внешнего ядра сопла оболочки. Соедините шприц с перекрестным раствором иглы G27 в сопле и загрузите шприц в одну из экструдерных крепления стерилизованного этанолом 3D-принтера.
Накрените шприц гидрогелем во второй экструдер и соедините его с соплом. Используйте замок Luer для подключения короткой трубки к боковой ввод Luer сопла ядра/оболочки. Тщательно вручную отрегулируйте выравнивание до тех пор, пока сопло не коснется поверхности, прежде чем убирать сопло на расстояние, равное внешнему диаметру сопла.
Импорт генерируемых эшафот g-код и нажмите Play, чтобы инициировать процесс печати. После печати, тщательно удалить субстрат с печатной эшафот и залить вторичного перекрестного раствора на весь эшафот. Инкубировать эшафот в течение одной минуты при комнатной температуре.
Чтобы отделить эшафот от субстрата, нежный тянуть эшафот боком. Если эшафот прочно прилип к субстрату, вставьте острый край между обоими материалами, чтобы отделить их. Перенесите эшафот в свежий контейнер.
УФ стерилизовать обе стороны эшафота в течение 30 минут с каждой стороны. Затем поместите эшафот в бесцветную среду культуры клеток и инкубировать эшафот на 37 градусов по Цельсию с 5%углекислого газа, по крайней мере 24 часов. На следующий день, урожай huvex из в пробирке культуры с 0,25%трипсина в течение пяти минут при 37 градусов по Цельсию.
Когда клетки отсоединились, остановить энзиматической реакции с 3 мл свежей среды культуры клеток и собирать клетки центрифугации. Повторно приостановить гранулы в свежей среде культуры, содержащей фенол красный, и разбавить клетки в 3,4 раза от 10 до пятой эндотелиальной клетки на миллилитр концентрации. Загрузите клетки в стерильный шприц 5 мл, оснащенный иглой 27 калибра, и найдите точку входа в эшафот.
Выравнивание иглы с прямой секцией леса нити, тщательно проколоть эшафот под низким углом. Подтвердите, что игла находится в полой нити канала и осторожно угнетает поршень, чтобы ввести примерно 1-2 мл клеточной подвески в эшафот. Поток подвески должен быть виден через полупрозрачный эшафот.
Когда весь эшафот был заполнен клеточной подвеской, погрузит эшафот в среду свежей клеточной культуры и верните эшафот в инкубатор клеточной культуры на срок до 10 дней. Для живых / мертвых изображений в конце инкубации, промыть эшафот с PBS, и использовать тупой конец иглы тщательно вводить жить / мертвый раствор в эшафот. Подтвердите, что раствор заполнил весь эшафот, и поместите эшафот при 37 градусах по Цельсию в течение 30 минут.
В конце инкубации, промыть эшафот с PBS, и тщательно перенести эшафот на стеклянную горку. Окрашенные клетки можно наблюдать в лесах под микроскопом флуоресценции. В этом поперечном сечении свеженапечатанных и постобработанных эшафот, четко видимый полый канал можно наблюдать в нити.
Даже после 72 часов инкубации в среде клеточной культуры при 37 градусах по Цельсию, как было продемонстрировано, нить сохраняет полую структуру по всей длине эшафота. Здесь показана репрезентативная живая/мертвая анализ эндотелиальных клеток после 48 часов культуры в эшафоте. Можно определить живые клетки по ярко-зеленому флуоресцентный сигнал.
Этот метод является основой для одношагового изготовления полых трубчатых лесов и может быть модернизирован путем прямой печати с использованием клеток, включенных в био-чернила.
Please enter your institutional email to check if you have access to this content
has access to
BackLogin to access JoVE
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
To receive a free trial, please fill out the form below.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You
Thank You
Thank You
CH
DE