Journal
/
Genetics
/
In Vitro Instrueret Udviklingen af en begrænsning Endonuclease med strengere specificitet
JoVE Journal
Genetics
This content is Free Access.
JoVE Journal Genetics
In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity

In Vitro Instrueret Udviklingen af en begrænsning Endonuclease med strengere specificitet

DOI:
10.3791/60807-v

•

09:16 min

•

March 25, 2020

•

,
1International Institute of Molecular and Cell Biology, Warsaw (IIMCB)

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:49Split-and-Mix Synthesis of Mutagenic Primers
  • 02:34Performing Compartmentalized In Vitro Transcription-translation Reaction
  • 05:07Continued Processing of Libraries and Selection
  • 07:20Results: Examples of Screening of NlaIV Variants for Sequence Specificity Alteration
  • 08:16Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Restriktionen endonucleases med ny sekvens specificitet kan udvikles fra enzymer, der genkender en delvist degenereret sekvens. Her giver vi en detaljeret protokol, som vi med succes har brugt til at ændre sekvensspecificiteten af NlaIV-enzymet. De vigtigste ingredienser i protokollen er in vitro-opdelingen af transskriptions-/oversættelsesreaktionen og udvælgelsen af varianter med nye sekvensspecificiteter.

Tags

Keywords: In Vitro Directed EvolutionRestriction EndonucleaseSequence SpecificityIn Vitro CompartmentalizationDirected EvolutionSubsaturation MutagenesisOligonucleotide SynthesisOil Surfactant MixtureLibrary Preparation

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

check_url/60807?article_type=v

Design og brug af en Low Cost, Automated Morbidostat for Adaptive Evolution Bacteria Under antibiotikum Drug Selection
check_url/60807?article_type=v

Procedure for Adaptive Laboratory Evolution af mikroorganismer Ved hjælp af en kemostat
check_url/60807?article_type=v

Genome Redigering og Directed Differentiering af hPSCs spørgekriterierne Lineage Determinanter i Human pancreas Development
check_url/60807?article_type=v

Kvantificering af oplysninger kodet af genet udtryk niveauer under levetid graduering Under bred vifte kosten begrænsning i C. elegans
check_url/60807?article_type=v

Generation af en gen-forstyrret Streptococcus mutans stamme uden Gene kloning
check_url/60807?article_type=v

Test af flerkopiværktøj plasmider rolle i udviklingen af antibiotikaresistens
check_url/60807?article_type=v

Genom-dækkende overvågning af transskription fejl i Eukaryote organismer
check_url/60807?article_type=v

Producerer gen sletninger i Escherichia coli af P1 transduktion med punktafgiftspligtige antibiotikaresistens kassetter
check_url/60807?article_type=v

Ved hjælp af in Vitro og i celler form at undersøge lille molekyle induceret Pre-mRNA strukturelle ændringer
check_url/60807?article_type=v

Ved hjælp af Sniper-Cas9 til at minimere Off target effekter af CRISPR-Cas9 uden tab af målaktiviteten Via styret Evolution

Read Article