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ひよこ豆の乾燥した根腐れ病アッセイ:詳細な方法論
Chapters
Summary January 17th, 2021
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本研究では、ひよこ豆-根支バタチコラ 相互作用の根底にある病態分子メカニズムを研究する方法論を提示する。ブロッティングペーパー法は、ひよこ豆遺伝子型応答を迅速に研究するのに有用であり、病気のポットベースの方法は、同時に干ばつと R.バタチコラ 感染を課し、寛容な遺伝子型のスクリーニングに使用することができます。
Transcript
本研究の主な目的は、ブロッティングペーパー技術やシックポット技術などの乾燥根腐敗病アッセイの詳細な方法論を実証することです。これらの技術は、ひよこ豆植物と根支バタチコーラの相互作用を研究するのに役立ちます.真菌病原体根動物症バタチコラとのひよこ植物の相互作用を理解することは、農業上重要です。
そのためには、汎用性と再現性の高いアッセイが必要です。ここでは、研究室で広く使用されている2つのアッセイを示します。そのうちの一つは紙ベースのブロッティングであり、もう1つは病気のポットベースのアッセイです。
ブロッティング紙アッセイを実行するには、斜め培養からペトリプレート、そして液体培養にスケールアップして根茎バタチコラ菌接種を調製します。ひよこ豆の保育園を準備し、大きな鍋に種をまきます。それらを根こそぎにして液体接種に入れ、ブロッティング紙の上に置きます。
病気の症状、すなわち、根の壊死、根腐れ、葉の黄変を接種の8日後に観察する。ここに示されているのは、紙の技術をブロッティングするステップです。病気のポットアッセイを実行するには、真菌でひよこ豆の食事を接種します。
摂氏30度で15日間インキュベーションした後、病気の文化が得られる。その後、それらを粉末にし、ポットミックスと混合します。コントロールポットと病気のポットに種をまきます。
次の日に、症状、すなわち根の壊死、根腐れ、および感染した植物の葉の黄変を観察し、播種の10日後に。病気の鍋はスケールアップすることができ、大規模なスクリーニングのために使用することができる。ここに示されているシックポット技術のステップの一言です。
根支バタチコラは、開発病原体です。この真菌は、植物感染中に主要なイヌクルとして機能するヒファエおよびミクロクレローティアを産生する。このアイソシエテ法を通じて適用される純粋な培養は、アッセイに使用される。
これらの成功したアッセイの重要なポイントは、最適な接種負荷です。ブロッティングペーパーの技術のデモンストレーションはここから始まります。液体リゾクトニアバタチコラ接種を調製するために、3日間の新鮮なプレート培養から真菌寒天プラグで500mlのスープを接種し、5日間摂氏28度のインキュベーターでフラスコをインキュベーターにインキュベートします。
マイクロスクレローティアで濃い灰色の真菌菌を除外します。オートクレーブ水で一時停止し、メディアを取り除きます。繰り返しますが、ミセリアをろ過し、数分間スロット乾燥して水分を取り除きます。
ジャムボトルに200mlのオートクレーブ水で100グラムの真菌接種を中断し、適切に混ぜます。表面滅菌種子をソラントに播種してひよこ豆の保育園を開発する。植物を播種の8日後に根こそぎにし、それらを洗い、オートクレーブROで洗い流します。ブロッティング紙を取り、一度折り、トレイの上に半分を置きます。
オートクレーブ水で濡らします。植物を取り、断続的な上下の動きで30秒間接種に浸します。根がシートの中に覆われ、フォリアが外にとどまるような方法で植物を置きます。
残りの半分を折り、紙を曲げる。制御のために、オートクレーブ水に植物を浸し、8日間成長室にトレイを保管してください。結果。葉の黄変、根腐れ、根根の壊死、横根の減少などの症状を観察してください。
病気のポット技術のデモンストレーションはここから始まります。市販のひよこ豆の種子を1キロ服用してください。種子を水道水で洗い、RO水で再び洗います。
種を5時間浸します。再び、RO水で種子を洗浄し、ジャムボトルに300グラムを加えます。121 LVSで15分間、2回連続してオートクレーブします。
冷却後、ボトルを層流に通します。3つの真菌寒天プラグでボトルを接種し、約4ミリメートルの正方形のサイズを差し込み、適切に混合するためによく振ります。ボトルを包み、摂氏30度のインキュベーターで15日間インキュベーターに入れします。
ひよこ豆の種子の周りに暗い菌体の成長を持つボトルを観察し、種子を削除します。室温で乾燥させ、粉末状にします。リゾクトニアバタチコラ粉末とソロライトを混ぜ、室温で5日間保ちます。
表面は、GT62種子を殺菌し、2センチメートルの深さでそれらをまきます。結果。病気のポットで90%の死亡率を観察してください。播種後10日後、根根の壊死や根根の根の減少や葉の黄変などの症状を次の日に観察する。
病気の鍋はフィールドの土の中でも準備することができます。干ばつと根支バタチコーラ感染症。水を源泉徴収して病気の鍋に干ばつストレスを課す。
ここに示されている植物は、制御、干ばつ、病原体、および同時に干ばつと病原体のストレスを受ける。症状、すなわち、より多くの壊死、根腐れ、および根の根の数の減少、および病原体のみの治療と比較して結合されたストレス治療における根の長さを観察する。結論。ブロッティング紙の技術は、インビトロ条件を行うことができる。
シックポット技術は、In Vivo条件で実行することができます。病原病の港では、異常ストレス、すなわち、干ばつストレスは、病原体感染と共に課すことができる。これらの技術を用いて、病原体感染パターンを研究することができる。
生理学的変化のほとんどは、ひよこ豆-根酸菌とバタチコラ相互作用の間に起こり、また、耐性のためにひよこ豆遺伝子型をスクリーニングする。ブロッティング紙のアッセイは、顕微鏡検査や分子生物学の研究のための品質サンプルを生成するのに非常に有用です。自然感染状態を模倣する病気のポットアッセイは、ひよこ豆の生殖器のスクリーニングに適用可能である。
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