Vi præsenterer en protokol for lameller forberedelse af springet frosne biologiske prøver af kryo-fokuserede ion stråle mikromaskiner til høj opløsning strukturelle undersøgelser af makromolekyler in situ med cryo-elektron tomografi. Den fremlagte protokol indeholder retningslinjer for udarbejdelse af lameller af høj kvalitet med høj reproducerbarhed til strukturel karakterisering af makromolekyler inde i Saccharomyces cerevisiae.