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無細胞システムを用いたタンパク質プロトタイピングのための、最小の線形テンプレートの増幅のための迅速で酵素的な方法
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Bioengineering
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JoVE Journal Bioengineering
Rapid, Enzymatic Methods for Amplification of Minimal, Linear Templates for Protein Prototyping using Cell-Free Systems
DOI:

07:35 min

June 14, 2021

,

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:42Amplifying the Gene Fragment via PCR
  • 02:21Digestion and Circularization
  • 03:28Isothermal Rolling Circle Amplification (RCA)
  • 04:28Cell-free Reaction and Subtilisin Assay
  • 05:41Results: Protein Expression from the Rolling Circle Amplification (RCA) Templates Using Cell-Free Systems
  • 06:49Conclusion

Summary

Automatic Translation

この研究は、クローニングや生きている細胞を使用せずに、合成遺伝子断片からタンパク質スクリーニングキャンペーンのための大量(μg-mg)量のDNAを作成するためのプロトコルを記述しています。最小のテンプレートは酵素的に消化され、円形化され、等熱転がり円増幅を使用して増幅される。無細胞発現反応は、非精製物で行うことができる。

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