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Métodos rápidos e enzimáticos para amplificação de modelos mínimos e lineares para prototipagem de proteínas usando sistemas livres de células
JoVE Journal
Bioengineering
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JoVE Journal Bioengineering
Rapid, Enzymatic Methods for Amplification of Minimal, Linear Templates for Protein Prototyping using Cell-Free Systems
DOI:

07:35 min

June 14, 2021

,

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:42Amplifying the Gene Fragment via PCR
  • 02:21Digestion and Circularization
  • 03:28Isothermal Rolling Circle Amplification (RCA)
  • 04:28Cell-free Reaction and Subtilisin Assay
  • 05:41Results: Protein Expression from the Rolling Circle Amplification (RCA) Templates Using Cell-Free Systems
  • 06:49Conclusion

Summary

Automatic Translation

O estudo descreve um protocolo para a criação de grandes (μg-mg) quantidades de DNA para campanhas de triagem de proteínas a partir de fragmentos de genes sintéticos sem clonagem ou uso de células vivas. O modelo mínimo é digerido e circularizado e, em seguida, amplificado usando amplificação do círculo de rolamento isotérmico. Reações de expressão livre de células poderiam ser realizadas com o produto não purificado.

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