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Metodi rapidi ed enzimatici per l'amplificazione di modelli minimi e lineari per la prototipazione di proteine utilizzando sistemi privi di cellule
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Chapters
- 00:05Introduction
- 00:42Amplifying the Gene Fragment via PCR
- 02:21Digestion and Circularization
- 03:28Isothermal Rolling Circle Amplification (RCA)
- 04:28Cell-free Reaction and Subtilisin Assay
- 05:41Results: Protein Expression from the Rolling Circle Amplification (RCA) Templates Using Cell-Free Systems
- 06:49Conclusion
Lo studio descrive un protocollo per la creazione di grandi quantità (μg-mg) di DNA per campagne di screening proteico da frammenti di geni sintetici senza clonazione o utilizzando cellule viventi. Il modello minimo viene digerito enzimaticamente e circolarizzato e quindi amplificato utilizzando l'amplificazione isotermica del cerchio di rotolamento. Le reazioni di espressione senza cellule potrebbero essere eseguite con il prodotto non purificato.
