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Metodi rapidi ed enzimatici per l'amplificazione di modelli minimi e lineari per la prototipazione di proteine utilizzando sistemi privi di cellule
JoVE Journal
Bioengineering
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JoVE Journal Bioengineering
Rapid, Enzymatic Methods for Amplification of Minimal, Linear Templates for Protein Prototyping using Cell-Free Systems
DOI:

07:35 min

June 14, 2021

,

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:42Amplifying the Gene Fragment via PCR
  • 02:21Digestion and Circularization
  • 03:28Isothermal Rolling Circle Amplification (RCA)
  • 04:28Cell-free Reaction and Subtilisin Assay
  • 05:41Results: Protein Expression from the Rolling Circle Amplification (RCA) Templates Using Cell-Free Systems
  • 06:49Conclusion

Summary

Automatic Translation

Lo studio descrive un protocollo per la creazione di grandi quantità (μg-mg) di DNA per campagne di screening proteico da frammenti di geni sintetici senza clonazione o utilizzando cellule viventi. Il modello minimo viene digerito enzimaticamente e circolarizzato e quindi amplificato utilizzando l'amplificazione isotermica del cerchio di rotolamento. Le reazioni di espressione senza cellule potrebbero essere eseguite con il prodotto non purificato.

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