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Métodos rápidos y enzimáticos para la amplificación de plantillas mínimas y lineales para la creación de prototipos de proteínas utilizando sistemas libres de células
JoVE Journal
Bioengineering
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JoVE Journal Bioengineering
Rapid, Enzymatic Methods for Amplification of Minimal, Linear Templates for Protein Prototyping using Cell-Free Systems
DOI:

07:35 min

June 14, 2021

,

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:42Amplifying the Gene Fragment via PCR
  • 02:21Digestion and Circularization
  • 03:28Isothermal Rolling Circle Amplification (RCA)
  • 04:28Cell-free Reaction and Subtilisin Assay
  • 05:41Results: Protein Expression from the Rolling Circle Amplification (RCA) Templates Using Cell-Free Systems
  • 06:49Conclusion

Summary

Automatic Translation

El estudio describe un protocolo para crear grandes cantidades (μg-mg) de ADN para campañas de detección de proteínas a partir de fragmentos de genes sintéticos sin clonar ni usar células vivas. La plantilla mínima se digiere y circula enzimáticamente y luego se amplifica mediante amplificación de círculo de rodadura isotérmica. Las reacciones de expresión libre de células podrían realizarse con el producto no purificado.

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