/
/
Snabba, enzymatiska metoder för förstärkning av minimala, linjära mallar för proteinprototyper med cellfria system
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Introduction
- 00:42Amplifying the Gene Fragment via PCR
- 02:21Digestion and Circularization
- 03:28Isothermal Rolling Circle Amplification (RCA)
- 04:28Cell-free Reaction and Subtilisin Assay
- 05:41Results: Protein Expression from the Rolling Circle Amplification (RCA) Templates Using Cell-Free Systems
- 06:49Conclusion
Studien beskriver ett protokoll för att skapa stora (μg-mg) mängder DNA för proteinscreeningskampanjer från syntetiska genfragment utan kloning eller användning av levande celler. Den minimala mallen smälts och cirkulariseras enzymatiskt och förstärks sedan med hjälp av istermisk förstärkning av rullande cirkel. Cellfria reaktioner kan utföras med den icke-försedda produkten.
