Aktuel anvendelse Bioassay til kvantificering af insekticidtoksicitet for myg og bananfluer

Ved direkte at anvende insekticid på insektet i stedet for gennem overfladekontakt er der minimal variation i insekticideksponering, og dette giver os mulighed for at måle modtagelighedsprofilen for myggepopulationer mere præcist. Den største fordel ved denne teknik er, at den giver os mulighed for at beregne masserelativiserede dødelige doser af et insekticid snarere end dødelige koncentrationer, hvilket i høj grad forbedrer sammenligninger af resistensforhold. Vær forsigtig med at opbevare insekticiderne korrekt, undgå at forurene dine værktøjer, og sørg for, at sprøjtedelene er i god form.

Dette vil hjælpe dig med at opnå konsistente resultater. Til at begynde med skal du fjerne de nødvendige insekticidopløsninger fra fryseren. Hvirvel straks opløsningen eller omvendt fem gange, og læg den i en lysbestandig beholder ved stuetemperatur for at lade insekticiderne varme op til stuetemperatur inden brug.

Sæt fem mikrocentrifugerør ud med 0,5 ml acetone hver. Fyld sprøjtetønden helt med acetone fra det første rør. Udvis derefter acetonen i en affaldsbeholder ved hurtigt at skubbe ned på stemplet, og gentag fire gange mere for at fuldføre i alt fem acetonevasker fra den samme acetone-alikvote.

Fyld derefter sprøjtetønden helt med luft, og udvis luften og potentielle acetonrester i affaldsbeholderen. Gentag yderligere to gange for at gennemføre tre vaske med luft. Opret en luftlomme i tønden mellem sprøjtestemplet og toppen af nålen ved at trække stemplet op cirka fem millimeter ind i tønden.

Mærk plastikbæerne med det tilfældige ID til vurdering af blind dødelighed. Brug en aspirator drevet af sugning fra indånding, aspirere det ønskede antal tre til fem dage gamle voksne myg. Placer spidsen af aspiratoren i røret med bomuld viklet rundt om spidsen.

Ånd forsigtigt ud, og tryk på aspiratoren for at overføre myggene til et konisk rør. Brug bomulden til at tilslutte røret, når aspiratorspidsen fjernes, og hætte derefter med låget. Slå kortvarigt myggene ned i rørene ved at placere dem i mindst 10 minutter ved fire grader Celsius eller begrave dem under isen i en isbakke.

Overfør de væltede myg til insekthåndteringsteltet. Tip forsigtigt myggene ud på en plastikbakke placeret på isen, og hæld omkring 50 myg ad gangen for at sikre, at hver rører ved den kølige bakke under den og forbliver slået ned. Sorter myggene efter køn ved forsigtigt at samle dem op ved benene eller vingerne med tang, efterfulgt af at placere hvert køn i en separat holdekop, og stop, når det ønskede antal er nået.

Under sorteringen skal du fjerne eventuelle myg, der er skadet eller er ekstra store eller små. For at registrere vægten af myggekoppen skal du placere en tom kop med en petriskål som låg på skalaen og tare skalaen. Hæld myggene i beholderen, og læg låget ovenpå.

Placer beholderen på skalaen, og registrer den endelige vægt sammen med antallet af myg. Anbring straks koppen med prøver tilbage på isen for at holde dem immobiliserede, indtil alle kopper af prøven er vejet. Opdel de tilberedte myg i fem til 10 separate kopper placeret på is, mærket med tilfældige id’er.

Brug pincet og en håndholdt tæller for at opnå 20 til 25 myg pr. Kop. For at sortere frugtfluerne skal du anæstesiere fluerne ved hjælp af kuldioxid i syv sekunder. Hæld fluerne på en ispose pakket ind i bænkpapir.

Brug en fintippet pensel til at adskille og tælle mænd og kvinder. Brug penslen til forsigtigt at samle de valgte fluer op, og læg dem i en ren, tom lagerflaske. Når du har valgt lige mange mandlige og kvindelige bananfluer, skal du mærke lagerflaskerne med stammenavnet og bananfluen i alt.

Anæstesi flasken med frugtfluer ved hjælp af kuldioxid i syv sekunder. Hæld bananfluerne på vejepapir, og brug papiret som en tragt til at introducere fluerne i et tjæret hætteglas mærket med et tilfældigt ID.Når du har lagt petriskålslåget oven på hætteglasset med bananfluer, skal du placere det på skalaen. Registrer den kombinerede vægt og antallet af prøver på scorearket.

Placer straks hætteglasset med bananfluer i en bakke med is med låget stadig ovenpå for at forhindre fluerne i at undslippe. Læg sprøjten med den korrekte insekticidkoncentration, begyndende med den mindst koncentrerede dosis og arbejd hen imod den mest koncentrerede dosis med hver gruppe organismer. Tip prøverne på vejepapir placeret oven på en bakke på isen.

Adskil prøverne, der er tæt på hinanden, ved hjælp af en ren insekticidfri pensel eller vatpind for at give nem adgang til hver prøve til dosering. Brug sprøjten til at anvende en dråbe insekticidopløsning på det ventrale thorax- og maveområde for myg og dorsum for frugtfluer. Hæld straks prøverne tilbage i den mærkede plastikkop.

Dæk koppen med net og et gummibånd. Bemærk et opdateret prøveantal på koppen, hvis nogen prøver blev dræbt, beskadiget eller undsluppet i denne proces. Læg den færdige kop i en holdebakke.

For den første kop skal du registrere det tidspunkt, hvor doseringen er afsluttet. Gentag doseringen for hver kop, indtil alle prøver er blevet doseret med de korrekte insekticidkoncentrationer, og registrer sluttidspunktet, når alle prøver er blevet doseret. Giv 10% saccharoseopløsning til hver kop via en våd vatpind, og opbevar myg og bananfluer ved den ønskede temperatur og fugtighed.

Registrer prøvedødelighed 24 timer efter starten af insekticideksponering. Klassificer myg som levende, hvis de kan flyve og holde sig oprejst og døde, hvis de er immobile eller ataxiske, som beskrevet af WHO. Følg den samme dødelighedsvurdering for bananfluer.

Efter at have udført bioassay blev der opnået dosisresponsdata med to stammer, der er Rockefeller og IICC genotype for den mandlige og kvindelige Aedes aegypti. Den masserelativiserede mediane dødelige dosis for Rockefeller og IICC var henholdsvis 0,008 og 0,336 nanogram pr. Milligram. Resultaterne afslørede ingen forskelle mellem dosisresponskurverne for kvindelige og mandlige myg inden for hver stamme.

Derfor blev data fra begge køn kombineret for at beregne de mediane dødelige dosisværdier. Da 95 % konfidensintervallerne for den mediane dødelige dosis af disse to stammer ikke overlappede hinanden, blev disse værdier betragtet som signifikant forskellige. Derudover var IICC-stammen ved beregning af de resistente forhold over 40 gange mere modstandsdygtig end den modtagelige Rockefeller-stamme.

Dosisresponsdata for bananflue, Drosophila melanogaster, Canton-S-stamme, blev også opnået, og den masserelativiserede mediane dødelige dosis viste sig at være 0,213 nanogram pr. Milligram. Konsistens er kritisk, især ved opbevaring og anvendelse af insekticidet og vurdering af dødelighed. Pas også på, når du håndterer prøven for at undgå skade eller død, der ikke induceres af insekticidet.

Med denne metode kan vi nu nøjagtigt bestemme den tekniske modstand hos en mygpopulation, og hvordan miljøforhold påvirker modstanden, eller hvordan teknisk modstand forudsiger praktisk modstand.