सामयिक अनुप्रयोग Bioassay मच्छरों और फल मक्खियों के लिए कीटनाशक विषाक्तता की मात्रा निर्धारित करने के लिए

सतह के संपर्क के बजाय कीट पर कीटनाशक को सीधे लागू करके, कीटनाशक जोखिम में न्यूनतम भिन्नता है, और यह हमें मच्छर आबादी की संवेदनशीलता प्रोफ़ाइल को अधिक सटीक रूप से मापने की अनुमति देता है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह हमें घातक सांद्रता के बजाय कीटनाशक की बड़े पैमाने पर सापेक्षीकृत घातक खुराक की गणना करने की अनुमति देता है, जो प्रतिरोध अनुपात तुलना में बहुत सुधार करता है। कीटनाशकों को ठीक से स्टोर करने के लिए सावधान रहें, अपने उपकरणों को दूषित करने से बचें, और सुनिश्चित करें कि सिरिंज के हिस्से अच्छे आकार में हैं।

यह आपको लगातार परिणाम प्राप्त करने में मदद करेगा। शुरू करने के लिए, फ्रीजर से आवश्यक कीटनाशक समाधान निकालें। तुरंत घोल को घुमाएं या पांच बार उलटें, और इसे कमरे के तापमान पर एक प्रकाश प्रतिरोधी कंटेनर में रखें ताकि कीटनाशकों को उपयोग करने से पहले कमरे के तापमान पर गर्म किया जा सके।

एसीटोन प्रत्येक के 0.5 मिलीलीटर के साथ पांच माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब सेट करें। पहली ट्यूब से एसीटोन के साथ सिरिंज बैरल को पूरी तरह से भरें। फिर प्लंजर पर तेजी से नीचे धकेलकर एसीटोन को एक अपशिष्ट कंटेनर में निष्कासित करें, और एक ही एसीटोन एलीकोट से कुल पांच एसीटोन वॉश को पूरा करने के लिए चार और बार दोहराएं।

फिर, सिरिंज बैरल को पूरी तरह से हवा से भरें, और अपशिष्ट कंटेनर में हवा और संभावित एसीटोन अवशेषों को निष्कासित करें। हवा के साथ तीन धोने को पूरा करने के लिए दो बार और दोहराएं। सिरिंज प्लंजर और सुई के शीर्ष के बीच बैरल के भीतर एक हवा की जेब बनाएँ बैरल में लगभग पांच मिलीमीटर प्लंजर खींचकर।

ब्लाइंड मृत्यु दर मूल्यांकन के लिए यादृच्छिक आईडी के साथ प्लास्टिक होल्डिंग कप लेबल करें। साँस लेने से सक्शन द्वारा संचालित एक एस्पिरेटर का उपयोग करके, तीन से पांच दिन के पुराने वयस्क मच्छरों की वांछित संख्या को एस्पिरेट करें। एस्पिरेटर की नोक को टिप के चारों ओर लपेटे गए कपास के साथ ट्यूब में रखें।

धीरे से साँस छोड़ें, और मच्छरों को एक शंक्वाकार ट्यूब में स्थानांतरित करने के लिए एस्पिरेटर को टैप करें। जब एस्पिरेटर टिप को हटा दिया जाता है, तो ट्यूब को प्लग करने के लिए कपास का उपयोग करें, और फिर ढक्कन के साथ कैप करें। संक्षेप में ट्यूबों में मच्छरों को चार डिग्री सेल्सियस पर कम से कम 10 मिनट के लिए रखकर या उन्हें बर्फ ट्रे में बर्फ के नीचे दफन करके नीचे गिराएं।

दस्तक मच्छरों को कीट हैंडलिंग तम्बू में स्थानांतरित करें। बर्फ पर रखे गए प्लास्टिक ट्रे पर मच्छरों को सावधानीपूर्वक टिप दें, और यह सुनिश्चित करने के लिए एक समय में लगभग 50 मच्छर डालें कि प्रत्येक इसके नीचे शांत ट्रे को छूता है और नीचे खटखटाया जाता है। मच्छरों को धीरे-धीरे संदंश के साथ पैरों या पंखों से उठाकर सेक्स द्वारा सॉर्ट करें, इसके बाद प्रत्येक सेक्स को एक अलग होल्डिंग कप में रखें, और वांछित संख्या तक पहुंचने पर रुकें।

छँटाई करते समय, किसी भी मच्छर को हटा दें जो घायल हो गए हैं या अतिरिक्त बड़े या छोटे हैं। मच्छर कप के वजन को रिकॉर्ड करने के लिए, पैमाने पर एक ढक्कन के रूप में पेट्री डिश के साथ एक खाली कप रखें, और पैमाने पर तारे। कंटेनर में मच्छरों को डालें, और ढक्कन को शीर्ष पर रखें।

कंटेनर को पैमाने पर रखें, और मच्छरों की संख्या के साथ अंतिम वजन रिकॉर्ड करें। नमूनों के कप को तुरंत बर्फ पर वापस रखें ताकि उन्हें तब तक स्थिर रखा जा सके जब तक कि नमूने के सभी कप ों का वजन न हो जाए। तैयार मच्छरों को बर्फ पर रखे गए पांच से 10 अलग-अलग कपों में विभाजित करें, जिन्हें यादृच्छिक आईडी के साथ लेबल किया गया है।

प्रति कप 20 से 25 मच्छरों को प्राप्त करने के लिए चिमटी और एक हैंडहेल्ड काउंटर का उपयोग करें। फल मक्खियों को सॉर्ट करने के लिए, सात सेकंड के लिए कार्बन डाइऑक्साइड का उपयोग करके मक्खियों को बेहोश करें। बेंच पेपर में लिपटे आइस पैक पर मक्खियों को डालें।

एक ठीक-इत्तला वाले पेंटब्रश का उपयोग करके, पुरुषों और महिलाओं को अलग और गिनें। चुने हुए मक्खियों को धीरे से लेने के लिए पेंटब्रश का उपयोग करें, और उन्हें एक साफ, खाली स्टॉक बोतल में रखें। नर और मादा फल मक्खियों की समान संख्या चुनने के बाद, स्टॉक की बोतलों को स्ट्रेन नाम और फल मक्खी कुल के साथ लेबल करें।

सात सेकंड के लिए कार्बन डाइऑक्साइड का उपयोग करके फल मक्खियों की बोतल को एनेस्थेटिक करें। फल मक्खियों को वजन वाले कागज पर डालें, और मक्खियों को एक यादृच्छिक आईडी के साथ लेबल किए गए एक तारांकित शीशी में मक्खियों को पेश करने के लिए एक फ़नल के रूप में कागज का उपयोग करें फल मक्खियों की शीशी के शीर्ष पर पेट्री डिश ढक्कन रखने के बाद, इसे पैमाने पर रखें। स्कोर शीट पर संयुक्त वजन और नमूनों की संख्या रिकॉर्ड करें।

तुरंत फल मक्खियों की शीशी को बर्फ की ट्रे में ढक्कन के साथ रखें, जो अभी भी ऊपर है ताकि मक्खियों को भागने से रोका जा सके। उचित कीटनाशक एकाग्रता के साथ सिरिंज को लोड करें, कम से कम केंद्रित खुराक के साथ शुरू करें और जीवों के प्रत्येक समूह के साथ सबसे अधिक केंद्रित खुराक की ओर काम करें। बर्फ पर एक ट्रे के ऊपर रखा वजन कागज पर नमूनों टिप.

उन नमूनों को अलग करें जो खुराक के लिए प्रत्येक नमूने तक आसान पहुंच की अनुमति देने के लिए एक स्वच्छ कीटनाशक-मुक्त पेंटब्रश या कपास झाड़ू का उपयोग करके एक साथ करीब हैं। सिरिंज का उपयोग करते हुए, मच्छरों के लिए वेंट्रल वक्ष और पेट क्षेत्र और फल मक्खियों के लिए डोरसम के लिए कीटनाशक समाधान की एक बूंद लागू करें। तुरंत नमूनों को लेबल किए गए प्लास्टिक कप में वापस डालें।

कप को नेटिंग और रबर बैंड के साथ कवर करें। कप पर एक अद्यतन नमूना गिनती नोट करें यदि इस प्रक्रिया में किसी भी नमूने को मार दिया गया था, क्षतिग्रस्त या बच गया था। पूर्ण कप को एक होल्डिंग ट्रे में रखें।

पहले कप के लिए, उस समय को रिकॉर्ड करें जब खुराक पूरी हो जाती है। प्रत्येक कप के लिए खुराक को दोहराएं जब तक कि सभी नमूनों को उचित कीटनाशक सांद्रता के साथ खुराक नहीं दी जाती है, और अंत के समय को रिकॉर्ड करें जब सभी नमूनों को खुराक दी गई हो। एक गीले कपास की गेंद के माध्यम से प्रत्येक कप के लिए 10% सुक्रोज समाधान प्रदान करें, और मच्छरों और फल मक्खियों को वांछित तापमान और आर्द्रता पर स्टोर करें।

कीटनाशक जोखिम की शुरुआत के 24 घंटे बाद रिकॉर्ड नमूना मृत्यु दर। मच्छरों को जीवित के रूप में वर्गीकृत करें यदि वे उड़ सकते हैं और खुद को सीधे और मृत रख सकते हैं यदि वे अचल या अक्षम्य हैं, जैसा कि डब्ल्यूएचओ द्वारा वर्णित है। फल मक्खियों के लिए एक ही मृत्यु दर मूल्यांकन का पालन करें।

बायोएसे करने के बाद, खुराक प्रतिक्रिया डेटा प्राप्त किया गया था जिसमें दो उपभेदों की विशेषता थी जो पुरुष और महिला एडीज एजिप्टी के लिए रॉकफेलर और आईआईसीसी जीनोटाइप हैं। रॉकफेलर और आईआईसीसी के लिए द्रव्यमान-सापेक्षीकृत औसत घातक खुराक क्रमशः 0.008 और 0.336 नैनोग्राम प्रति मिलीग्राम थी। परिणामों से पता चला कि प्रत्येक तनाव के भीतर मादा और पुरुष मच्छरों की खुराक प्रतिक्रिया घटता के बीच कोई अंतर नहीं है।

इसलिए, दोनों लिंगों के डेटा को औसत घातक खुराक मूल्यों की गणना करने के लिए जोड़ा गया था। चूंकि इन दो उपभेदों की औसत घातक खुराक के लिए 95% आत्मविश्वास अंतराल ओवरलैप नहीं हुआ था, इसलिए इन मूल्यों को काफी अलग माना जाता था। इसके अतिरिक्त, प्रतिरोधी अनुपात की गणना करते समय, आईआईसीसी तनाव अतिसंवेदनशील रॉकफेलर तनाव की तुलना में 40 गुना अधिक प्रतिरोधी था।

फल मक्खी, ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर, कैंटन-एस स्ट्रेन के लिए खुराक प्रतिक्रिया डेटा भी प्राप्त किया गया था, और बड़े पैमाने पर सापेक्षीकृत औसत घातक खुराक प्रति मिलीग्राम 0.213 नैनोग्राम पाई गई थी। स्थिरता महत्वपूर्ण है, खासकर जब कीटनाशक का भंडारण और लागू करना और मृत्यु दर का आकलन करना। इसके अलावा, नुकसान या मौत से बचने के लिए नमूने को संभालते समय ध्यान रखें जो कीटनाशक से प्रेरित नहीं है।

इस विधि के साथ, अब हम मच्छर आबादी के तकनीकी प्रतिरोध को सही ढंग से निर्धारित कर सकते हैं और पर्यावरणीय स्थितियां प्रतिरोध को कैसे प्रभावित करती हैं या तकनीकी प्रतिरोध व्यावहारिक प्रतिरोध की भविष्यवाणी कैसे करता है।