A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:04Introduction
- 00:58Preparation of CRISPR Gene Editing and Guide RNA Design to Generate miRNA Cluster Knockout Cell Lines
- 02:06Generation of Stable Lentiviral Cell Lines Carrying the DOX-Inducible Cas9 Expression Cassette
- 03:20Performing CRISPR Reactions by Cas9 Induction and Synthetic Guide RNA Transfection of Cells Using a High-Throughput Format
- 07:22PCR Genotyping of CRISPR Cell Lines Using Crude Cell Lysates
- 08:37Results: High-Throughput CRISPR Experimental Design to Generate Multiple miR-888 Cluster Deletion Combinations
- 09:51Conclusion
Этот протокол описывает высокопроизводительный процесс редактирования генов кластеризованных регулярно чередующихся коротких палиндромных повторов (CRISPR) для анализа сети кластеров микроРНК, который позволяет быстро генерировать панель генетически модифицированных клеточных линий, несущих уникальные комбинации делеции членов кластера miRNA размером до 35 кб в рамках одного эксперимента.
