大鼠主动迟发型超敏反应(DTH)的诱导和监控

Published 7/19/2007
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Biology

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Summary

迟发型超敏反应(DTH)是一个CCR7的效应记忆T淋巴细胞介导的​​炎症反应。在这里,我们演示了如何在Lewis大鼠诱发积极的DTH和监测炎症反应。

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Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats. J. Vis. Exp. (6), e237, doi:10.3791/237 (2007).

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Abstract

迟发型超敏反应(DTH)是一个CCR7的效应记忆T淋巴细胞浸润针对其免疫系统已催芽的抗原注射部位介导的炎症反应。炎症反应的特点是由抗原挑战的部位的皮肤发红和肿胀。这是一个方便的模型,以确定在体内的免疫抑制剂的疗效。可诱发皮肤直接到户,抗原特异性T淋巴细胞过继转移或与抗原的主动免疫,并随后在给定面积的皮肤,诱发炎症反应的抗原皮内挑战。 DTH反应,可诱发各种抗原,如卵清蛋白,结核菌素,破伤风类毒素,或锁孔戚血蓝蛋白(KLH)。

在这里,我们将演示如何在Lewis大鼠诱发积极的DTH反应。首先,我们将准备在完全弗氏佐剂了,我们感兴趣的抗原,KLH的油包水型乳化液和乳液皮下注入大鼠。这将总理的免疫系统的开发记忆性T细胞向KLH。七天以后,我们将挑战老鼠皮内与KLH的一方和一个不相关的抗原卵清蛋白,背面,在另一边。炎症反应将是可见的16-72小时后,红肿的面积将测量的DTH严重性的迹象。

Protocol

1。乳液的制备

  1. 乳液是一种抗原(DTH可诱发各种抗原卵清蛋白,破伤风类毒素,钥匙孔戚血蓝蛋白在水溶液中....)完全弗氏佐剂1:1混合。添加抗原的辅助,而不是反过来,这是非常重要的!

  2. 决策和乳状液注射时,有大量的浪费,所以总是比你需要更多的准备1.5或2倍。

  3. 准备了2毫克/毫升溶液溶解在生理盐水抗原。不过滤,因为你不想松散的聚合!

  4. 把完成弗氏佐剂H37Ra(DIFCO,目录#231131)在管和高速旋涡。添加一滴抗原下降,而震荡。当所有的抗原添加,涡为5分钟。该混合物应该变成白色。

  5. 放在一个玻璃注射器的乳液,并链接到另一个玻璃注射器使用18G桥(费舍尔目录#14 - 825 - 17L)。从注射器向对方发送乳液,直到它变得坚硬(5-10分钟)。最好的方法是使用两个5毫升注射器。如果超过5毫升的乳液是必需的,使用5毫升注射器的几套。

  6. 乳液可以保存在4 ° C,连续3周在注射器。

2。免疫的老鼠

  1. 在几分钟注射器混合乳化液和注射用的注射器转移。在1-2个基地的尾部使用23G的针头和一个露儿乐提示3 ml注射器注入200毫升皮下注射。

3。抗原在后面的挑战

  1. 免疫接种后第7天,刮脸的老鼠的背上2点,在一个地方和生理盐水在其他地点(或不相关的抗原),皮内注射1 mg / ml的抗原溶液20毫升。不过滤的抗原的解决方案,您可能会失去聚集,增强炎症反应。

  2. 老鼠应anesthesized,以避免运动。注入皮内使用27G半针和1毫升注射器的解决方案。变化之间的注射针头。

    :挑战可以做回更精确的测量,而不是耳朵的耳廓。见视频http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=325

4。测量的DTH

  1. 注射部位会开始变红,肿胀炎症的标志。用一把尺子或更好,但卡尺测量直径发炎面积。最大的肿胀发生24小时和72小时之间。

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Discussion

对于DTH反应更精确的测量,我们建议挑战与抗原在耳的耳廓大鼠。测得的反应,然后可以在耳肿胀相关抗原挑战的耳朵,或者生理盐水单独或与不相关的抗原挑战耳之间的差异。在耳边的挑战示范如图1所示。

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Disclosures

作者的共同创始人和顾问Airmid公司

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Complete Freund’s adjuvant H37Ra Reagent Difco Laboratories 231131 Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin Reagent Sigma-Aldrich H-5654
Ovalbumin Reagent Sigma-Aldrich A-5503
5 ml glass syringes Tool Fisher Scientific 14-823-10 B Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge Tool Fisher Scientific 14-825-17L
Lewis rats Animal Harlan Laboratories Female rats 7-9 weeks old
23G 1" needles Tool Fisher Scientific 14-826 AA It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes Tool Fisher Scientific 05-561-63
DPBS Reagent GIBCO, by Life Technologies 14040-182
1 ml regular tip syringes Tool Fisher Scientific 22-257-154
27G 1/2" needles Tool Fisher Scientific 14-826-48
Electric cordless trimmer Tool Braintree Scientific, Inc. CLP-32130 To shave the rats before antigen challenge in the back.
Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved. Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.

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References

  1. Forthcoming.

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