Author Produced

Tüm Kan enoksaparin Antikoagülan Etkinliğinin Rapid Point-of-Care Assay

Medicine
 

Summary

Düşük molekül ağırlıklı heparin, enoksaparin tarafından kan pıhtılaşma inhibisyonunun hızlı bir nicel tahlil gösterilmesi. Enoksaparin katkısı heparinase ile sindirim yoluyla nüfuzunu kaldırarak tarafından değerlendirilir. Testin A dolgun açıklaması bizim yayınlanan yazıda ayrıntılı.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Inchiosa Jr., M. A., Pothula, S., Kubal, K., Sanchala, V. T., Navarro, I. Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood. J. Vis. Exp. (68), e3852, doi:10.3791/3852 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Bir hastanın kan etkili bir şekilde düşük molekül ağırlıklı heparin (LMWH), enoksaparin ile antikoagüle olduğu için derecesinin saptanması için bir klinik deneme için bir ihtiyaç vardır. Bu hızla tespit edilebilir eğer önemli olacağını nerede acil klinik durumlar da vardır. Mevcut tahlil Bunu gerçekleştirmek için tasarlanmıştır. Biz sadece enoksaparin konsantrasyonu bilinen çivili edildi insan kan numunelerinin tahlil. Bu tahlil maddenin esas teşkil eden bir özelliği heparinase ile hareketsizlik tamamlamak indirgenmesi yoluyla bir hastanın kan örneği içinde enoksaparin etkinliğinin ölçümü olup. Enoksaparin ile çivili edildi; iki Vacutainer tüplere kan örnekleri (Franklin Lakes, NJ Becton Dickenson-); içine çekildi bir numune, 37 ° C'de 5 dakika için heparinase ile sindirildi, diğer numune ölçüldü ve başlangıç ​​noktası antikoagüle durumu temsil etmektedir. Heparinase işleme tabi tutulmuş numunede pıhtılaşma süresinin yüzde kısalık, b ile karşılaştırıldığındaaseline devlet, enoksaparin antikoagülan katkı vermiştir. Biz pıhtılaşma kez ölçümleri (Uluslararası Technidyne Corp, Edison, NJ) için taşınabilir, pille çalışan Hemochron 801 aparatlar kullandı. Cihaz 2 termostatik olarak kontrol edilen (37 ° C) tahlil kuyulardaki sahiptir. Biz cihazın üreticisinden kullanılabilir olan tahlil kartuşları iki tip deneyleri yapılmıştır. Bir kartuş duyarlılığını artırmak için modifiye edildi. Bu etkinleştiriciler gibi, sadece boru ve cam yüzeyi ve belki de tespit mıknatıs bırakarak, damıtık su ile durulama yoluyla geniş FTK-ACT kartuşunun kaolin kaldırılır. Biz bu minimal aktif assay (MAA) denir. Minimal aktif testinin kullanımı bize ve diğerleri tarafından araştırılmıştır. 2-4 çalışılmıştır ikinci kartuş bir aktive parsiyel tromboplastin zamanı (aPTT) assay (A104) idi. Bu üretici tarafından sağlanan olarak kullanılmıştır. Alet wer termostatlı bir kuyuE heparinase sindirim ve pıhtılaşma testleri hem kullanılmaktadır. Test 10 dakika içinde tamamlanabilir. MAA testi tipik klinik konsantrasyon aralığında enoksaparin heparinase sindirim sonra pıhtılaşma zamanı sağlam değişiklikler saptandı. 0.2 At kan örneği ml başına enoksaparin anti-Xa IU, heparinase sindirim pıhtılaşma zamanı içinde% 9.8 'lik bir ortalama düşüş (20.4 sn) neden olduğu; enoksaparin ml başına 1.0 IU az% 41.4 azalma (148.8 sn) vardı. Bu rapor sadece testinin deneysel uygulama sunuyor; klinik bir ortamda onun değerini hala kurulmalıdır.

Protocol

1. Heparinase Sulandırma

  1. Liyofilize heparinase bir saflaştırılmış protein 1 ug içeren şişeler içine (Siemens, Newark, Delaware, DadeHepzyme REF B4240-10), ticari olarak elde edilir. Protein tuzlu 0.25 ml (% 0.9 NaCI) içinde çözülür.

2. Kan Örnekleri Koleksiyonu

  1. Vacutainer tüpleri (; Franklin Lakes, NJ Becton-Dickinson), tamponlu; İki kan örnekleri sodyum sitrat (3,2% 0,3 ml 0.109M) içine vakum ile çizilmiş tüpler hem enoksaparin bilinen bir konsantrasyon ile önceden çivili vardır; kan hacmi 2.7 ml çizilen. Toplam içeriği daha sonra 3.0 ml 'dir.

3. Heparinase Sindirim

  1. Bir şırınga (; şişeye% 80 ve yaklaşık 0.2 ml 0.8 ug protein) aspire edilebilir heparinase şişenin tüm içeriği, bir Vacutainer tüpüne aktarılır; tuzlu 0.2 ml (% 0.9 NaCl) ilave edilir basel olarak hizmet veren ikinci tüp,enoksaparin etkisi eliminasyon öncesi ine devlet.
  2. Her iki Vacutainer tüplere, 5 dakikalık bir süre için Hemochron aparat termostatlı bir kuyu içine yerleştirilir. (Heparinase ile 5 dakika sindirim süresi yeterliliği, önceden yayınlanmış çalışma kurulmuştur. 1)

4. Pıhtılaşma Tahliller

  1. Heparinase inkübasyon sonunda, kan 2.0 ml tahlil kartuş için transfer edilir. MAA tüp durumda, pıhtılaşma başlatmak için 250 mM CaCl2, 0.1 ml ile önceden doldurulur. Ticari aPTT tahlil kartuş (A104) antikoagulan olarak sodyum sitrat içeren Vacutainer tüplere içine çekilmiş edildiği tam kan pıhtılaşma başlatmak için tasarlanmıştır.
  2. Hemochron cihaz kan pıhtılaşmasının tamamlanmasını sinyaller ve saniye cinsinden pıhtılaşma kez korur. Pıhtılaşma ti ile bölünmüş heparinase ile tedavi edilen örnek ve baz örnek arasındaki pıhtılaşma zamanlarda farklılıkme temel örnek için, enoksaparin giderilmesi sonucu yüzde azalma elde edilir. Aşağıda tartışıldığı gibi, kuvvetli lineer bir anti-Xa chromgenic tahlili ile ölçülen enoksaparin konsantrasyonu ile korelasyon için yüzde pıhtılaşma zaman içinde azalmasına ve tam kan örnekleri içinde çivili enoksaparin konsantrasyonu yanı sıra arasındaki ilişki için elde edilmiştir aktivite. Enoksaparin konsantrasyon Anti-Xa deneyleri iki aşamalı bir kromojenik tahlil için bir ticari kit (; Aniara, Mason, OH BIOPHEN) ile yapılmıştır.

Representative Results

Şekil 1 enoksaparin çivili konsantrasyonları (ml başına 0.2, 0.4 ve 1.0 anti-Xa IU) bir dizi için heparinase ile enoksaparin eleme sonrasında pıhtılaşma zamanında oranında azalma arasındaki ilişkiler için sonuçlar sunuyor. Sonuçlar MAA ve aPTT tahlil kartuşlarının sunulmaktadır. Anti-Xa aktivitesi kromojenik tahlil dan enoksaparin ölçülen konsantrasyonlar, aynı zamanda her bir arsa absis olarak dahil edilmiştir.

Şekil 2, anti-Xa aktivitesi kromojenik ölçümü vs pıhtılaşma süresi içinde yüzde düşüş olarak aynı veri grafikleri göstermektedir.

Yüksek istatistiksel anlamlar ile güçlü lineer korelasyon, dört ilişkileri bulunmuştur.

Şekil 1
Şekil 1. Enoksaparin Contr bakım tespitler noktasındaheparinase ile inkübasyondan sonra pıhtılaşma zamanı yüzde değişim (kısalma) esas çivili tam kan pıhtılaşma kere ibution. Çivili enoksaparin konsantrasyonları tam kan eklenir ve ölçülen anti-Xa plazma konsantrasyonları (parantez içinde ± SE, ortalama) her bir grafik absis olarak yerleştirilir. Pıhtılaşma kez tüm yüzde değişiklikleri birkaç saniye içinde pıhtılaşma süresi ortalama kısalması ile birlikte, araç veya SE olarak sunulmuştur. Aynı hastaya ikinci veri kesik çizgiler ile birbirine bağlanmıştır. Arsa olarak bir yıldız işareti ile tespit edilen dört hasta için veriler A (MAA sonuçlar) arsa B dört hastada (aPTT denemeleri) aynıdır. Bulgular, tek tayin temsil eder. Pearson korelasyon katsayıları r = 0.869 (p = 1,9 x 10 -5) ve r = 0,916 (p = 2,8 x 10 -5) sırasıyla MAA ve aPTTassay ile ilişkiler için,. Inchiosa ark izniyle yayınlanmıştır. 1


. Şekil 2 Şekil 1A ve B de gösterildiği gibi nokta-of-bakım tayinlerde pıhtılaşma zamanlarına yüzde değişiklikler için sonuçlar plazma anti-faktör Xa konsantrasyonlarına karşı çizilen A, MAA sonuçları;. B, aPTT ölçülür. Bulgular, tek bir pıhtılaşma süresi deneyler, anti-faktör Xa konsantrasyonları tek tayin gelmektedir. Pearson korelasyon katsayıları r = 0.910 idi (p = 2.5 x 10 -6) ve r = 0.922 (p = 2,0 x 10 -5) sırasıyla Inchiosa ark izniyle yayınlanmıştır MAA ve aPTT testi ile ilişkiler için,. 1

Discussion

Enoksaparin etkinliğinin Bu testte kanama veya hematom gelişme bir görevli riski olan bir invaziv prosedürü yerine göreli güvenliği belirlemek için önemli bir seçenek olarak hizmet verebilir. Epidural enjeksiyonu kabul ediliyor, bu önem olurdu. Kılavuzlarının çoğunluğu enoksaparin ve invaziv bir prosedür başlama enjeksiyonu arasındaki 12 saatlik bir bekleme süresi önerilir 5 Böbrek yetmezliği, obezite ve gebelik enoksaparin dozaj gereksinimlerini etkileyebilir 6,7 deneyi 10 gün içinde tamamlanabilir beri.. - dk dönemde, o venöz tromboembolizm gelişme riski olan hastalarda antikoagülasyon yeterliliği hakkında bilgi sağlayacak bir klinik veya doktor ofisinde, ayrıca kullanılabilir. Gerektiğinde Hemen doz ayarlamaları, tesis edilebilir.

Plazmadaki enoksaparin konsantrasyonu bir kromojenik ile ölçülebilirpıhtılaşma faktörü Xa inhibisyonu derecesinin ssay. Ancak, bu sadece konsantrasyon değil, özellikle bireysel hastalar arasında geniş çapta değişmektedir onun antikoagülan etkinliği. 6-8 verir

Çalışmalarımız tek enoksaparin ile gerçekleştirilmiştir. Ancak, bu tahlil heparinase I. Bu zaten dalteparin, NADROPARİN ve tinzaparin için geçerli olduğu bilinmektedir indirgenir herhangi LMWH için uygulanabilir olduğu tahmin edilebilir. 9-11 Bu özellikleri ile ilgili olarak tahlil tasarlanmış Hemochron pıhtılaşma zamanı enstrüman. Cihaz nispeten ucuzdur, aynı zamanda, tek kullanımlık kan toplama tüpleri, heparinase ampul ve tahlil kartuşları bir hasta için bir analiz yaklaşık 15 $ tamamlamak için. Böylece, çeşitli klinik ortamlarda antikoagülan durumunu izlemek için uygun olması beklenir.

Disclosures

Yazarlar ifşa etmek başka bir şey var.

Acknowledgments

Soruşturmalar sadece departman ve kurumsal kaynakların desteği ile yürütülmüştür. Koagülasyon cihazı (Hemochron 801) üretici yükümlülüğü olmaksızın kiralandı. Tahlil kartuşları perakende pahasına satın alınmıştır. Video tanıtım rakam Sanderink, ark güncellenmiştir. 12 video ikinci rakam (heparinase sindirim süresi elbette) Inchiosa ark izni ile yapıldı. 1

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hepzyme Siemens AG B4240 heparinase I
"MAA" cartridge Technidyne FTK-ACT modified by kaolin removal
aPTT cartridge Technidyne A104

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Inchiosa, M. A. J. r, Pothula, S., Kubal, K., Sanchala, V. T., Navarro, I. Toward development of a point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant activity in whole blood. J. Thromb. Thrombolysis. 32, 47-53 (2011).
  2. Despotis, G. J., Filos, K. S., Levine, V., Alsoufiev, A., Spitznagel, E. Aprotinin prolongs activated and nonactivated whole blood clotting time and potentiates the effect of heparin in vitro. Anesth. Analg. 82, 1126-1131 (1996).
  3. Pothula, S., Inchiosa, M. A. Jr, Sanchala, V. T., Sarabu, M., Inchiosa, A. S. In vitro effect of protamine excess on blood coagulation assays. Anesth Analg. 96, SCA39 (2010).
  4. Inchiosa, M. Jr, Pothula, S., Sanchala, V., Kubal, K. Detection of low plasma levels of low molecular weight heparin. Anesth Analg. 102, SCA10 (2010).
  5. Gogarten, W. The influence of new antithrombotic drugs on regional anesthesia. Curr. Opin. Anaesthesiol. 19, 545-550 (2006).
  6. Gouin-Thibault, I., Pautas, E., Siguret, V. Safety profile of different low-molecular weight heparins used at therapeutic dose. Drug Saf. 28, 333-349 (2005).
  7. Bazinet, A., Almanric, K., Brunet, C., Turcotte, I., Martineau, J., Caron, S., Blais, N., Lalonde, L. Dosage of enoxaparin among obese and renal impairment patients. Thromb. Res. 116, 41-50 (2005).
  8. El Rouby, S., Cohen, M., Gonzales, A., Hoppensteadt, D., Lee, T., Zucker, M. L., Khalid, K., LaDuca, F. M., Fareed, J. The use of a HEMOCHRON JR. HEMONOXTM point of care test in monitoring the anticoagulant effect of enoxaparin during interventional coronary procedures. J. Thromb. Thrombolysis. 21, 137-145 (2006).
  9. Yang, V. C., Bernstein, H., Cooney, C. L., Kadam, J. C., Langer, R. Removal of the anticoagulant activities of the low molecular weight heparin fractions and fragments with flavobacterial heparinase. Thromb Res. 44, 599-610 (1986).
  10. Maddineni, J., Walenga, J. M., Jeske, W. P., Hoppensteadt, D. A., Fareed, J., Wahi, R., Bick, R. L. Product individuality of commercially available low-molecular-weight heparins and their generic versions: therapeutic implications. Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 12, 267-276 (2006).
  11. Wijnhoven, T. J., van de Westerlo, E. M., Smits, N. C., Lensen, J. F., Rops, A. L., vander Vlag, J., Berden, J. H., vanden Heuvel, L. P., van Kuppevelt, T. H. Characterization of anticoagulant heparinoids by immunoprofiling. Glycoconj. J. 25, 177-185 (2008).
  12. Sanderink, G. -J. C. M., Guimart, C. G., Ozoux, M. -L., Jariwala, N. U., Shukla, U. A., Boutouyrie, B. X. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of the prophylactic dose of enoxaparin once daily over 4 days in patients with renal impairment. Thromb. Res. 105, 225-231 (2002).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics