На месте Прямая мышца живота Поперечная мышечно-кожный щитка: крысиной модели реперфузионных повреждений мышечно-кожный ишемии

1Department of Surgery, Royal Infirmary of Edinburgh, 2Department of Nephrology, Royal Infirmary of Edinburgh
Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Бесплатный трансфер из ткани широко применяется в реконструктивной хирургии для восстановления формы и функции после резекции онкологических и травмы. Предварительная этой ткани до операции может улучшить результат. В этой статье описывается

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Edmunds, M. C., Wigmore, S., Kluth, D. In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury. J. Vis. Exp. (76), e50473, doi:10.3791/50473 (2013).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Бесплатный трансфер из ткани является золотым стандартом реконструктивной хирургии для восстановления сложные дефекты не поддаются местные варианты или те, которые требуют композитные ткани. Ишемией травмы (ИРИ) является известной причиной частичного отказа клапана бесплатно и не имеет эффективного лечения. Создание лабораторной модели этой травмы может оказаться дорогостоящим, как финансово, так как более крупных млекопитающих, обычно используемого и в экспертизе, требуемых технической сложности этих процедур обычно требует использования опытных микрохирурга. В этой публикации и видео демонстрации эффективности использования модели IRI у крыс, которые не требуют микрохирургических опыта. Эта процедура на месте модель поперечного мышечно-кожных живота (TRAM) заслонка где атравматических зажимы используются для воспроизведения ишемии-реперфузии, связанные с этой операцией. Лазерной доплеровской томография (LDI) сканера используется для оценки перфузии лоскута и обработки изображений SoftwaRe, изображения J оценить процент площади кожи выживание как основного исхода травмы.

Introduction

Целью настоящего Протокола является демонстрация надежности и воспроизводимости модели ишемии-реперфузии наблюдается в тканях бесплатный трансфер чтобы интервенционных стратегий предстоит изучить.

Аэропорт ткани определяется как сосудистый отряда изолированный блок ткани с последующим аутологичной трансплантации этой ткани с анастомоз пересеченного сосуды лоскута на родном сосудов при получатель сайта. Эта процедура известна как ФОН и ткань передается называют свободного лоскута.

Бесплатный трансфер из ткани является золотым стандартом подход к коррекции сложных, составных дефектов, где местные варианты не подходят или не доступно. 1-4 ишемией травмы (ИРИ) не является неизбежным в бесплатный трансфер ткани, способствует лоскут неудачи 5,6 и не имеет эффективное лечение. Выборность бесплатных операций лоскута позволяет администрации фармакологическиеCAL агентов предпосылкой против ИРИ.

ИРИ ведет к ослаблению потока через микроциркуляции активации эндотелиальных и метаболические нарушения, 7 повышенной проницаемости капилляров и последующего интерстициального отека 7, приток воспалительных клеток, 8 высвобождение медиаторов воспаления, активные формы кислорода 9 и дополнения осаждения. 10 Этот сложный процесс гипоксии и последующее реперфузионное повреждение в конечном счете, приводит к гибели клеток. Модель позволяет мышечно-кожный IRI эффективность предварительной стратегии на клинические исходы в оценке. Недавние исследования подтвердили ценность животных моделях исследования IRI в качестве суррогата человеческой IRI путем сравнения молекулярные изменения, наблюдаемые у человека и имеющиеся данные по животным. 10,11

Крыса поперечной прямой мышцы живота мышечно-кожный (трамвай) лоскут был впервые описан в 1987 году на немецком языке и 12 в 1993 году13 на английском языке. Эта модель приобрела широкую популярность 13-25 как дешевая, надежная модель для изучения различных стратегий по снижению ИРИ, связанные с бесплатным трансфером ткани. 14,17-22 Большинство этих исследований были разработаны в качестве unipedicled закрылки трамвай на основе глубокого, уступает, . эпигастральной сосудистой ножке 15-18,20-22 Сравнение данных этих исследований осложняется использовании различных размеров острова кожный (10,5 - 30 см 2) и различной длины послеоперационном периоде (2 - 10 дней). Средний общий процент площади некроза лоскута в контрольной группе этих исследований составляет 69 ± 6,2% (среднее ± SEM). Следует отметить, что эти шесть документов всех специалистов, прямая мышца живота в качестве носителя для сосудистой ножке, но не подвергайте, разделяй и microanastomose или зажим сосудов. Чжан и др.. 23 описали правда, свободным лоскутом ТРАМВАЙ крысы на основе превосходной эпигастральной судов, в которых Fкругов были подняты, сосудов разделена и мышечно-кожный лоскут передаются и microanastomosed в пах сосудов. Это сложная техника требует микроанастомоза 0,45 - 0,5 мм калибра сосудов. Только пятнадцать были выполнены, и из этих 67% выжили. 23 модели, описанной Чжан и др.. 23 является отличной моделью для человека свободным лоскутом трамвайные остановки, а это действительно отражает травмы, полученной во время FTT. Других опубликованных моделей лоскута ТРАМВАЙ крысы более точно отражают травмы, полученные во время человека на питающей ножке трамвай, но не точно отражают ИРИ, поскольку эти лоскута не подвергаются ишемического периода с последующей реперфузией как сосудистая ножка никогда не зажаты или разделены и микроанастомоза выполнена. Этот протокол и видео описывают новую модель свободного агента ткани с помощью крысы Трамвай в которой IRI реплицируется использованием microclamps. Это более точно повторяет IRI, чем ножки предшественников трамвай, но технически проще, чем performiнг микроанастомоза. Microclamps широко используемых трансплантации исследователи воссоздать ИРИ, связанных с твердой трансплантации органов; 26-33 однако, это впервые было описано в клапане TRAM крысы.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Все операции проводят в соответствии с руководящими принципами, изложенными внутренних дел Соединенного Королевства и Университета Эдинбурга Департамента ветеринарии Services.

1. Хирургическая процедура установки Примечания

  1. Изменение в чистой хирургической скрабы, платья, шапки скраб и маска. Очистить все поверхности операционной включая оборудование с 2% раствор хлоргексидина в 70% изопропилового спирта.
  2. До операции автоклав все хирургические материалы и инструменты, которые будут использоваться в процедуре. Стерильные пакеты на операцию должны включать: 3 шторы, марля, аппликаторы хлопка наконечником, силиконовая пленка и хирургических инструментов, см. таблицу конкретных хирургических материалов и инструментов и на рисунке 1. Взвесьте крысы и отмерить соответствующий объем бупренорфин (0,04 мг / кг) можно вводить подкожно 1 час до завершения процедуры. Выложите, 3 х 1 мл шприца для подкожного введения жидкости во время SurgЭри, 2 х 6-0 викриловыми швы, 1 х 5-0 швов Ethilon, стерильные маркер с линейкой и 10-лопастная одноразовый скальпель, 4 - 5 пар стерильные перчатки и ручной прижигание блока.
  3. Место 4 х 10 мл стерильного 0,9% физиологического раствора флаконы на водяной бане нагревают до 37 ° С. Это будет использоваться для замены жидкости подкожный (1 мл / кг / ч) и промыть место операции. Настройка теплокровного одеяла, ректального датчика, инфракрасная лампа, операционного микроскопа и обезболивающие буровой установки. Включите лазер и его программного обеспечения, настройка другой установки анестетика и поместить тепла площадку под черный матовый, на котором животное будет лежать во время сканирования.
  4. Используйте мужчин, Льюис крыс весом 250-300 г. Дом крыс в течение 7 дней с едой и воду без ограничений с 12 часов свет-темнота циклов, прежде чем любая операция выполняется.

2. Анестезия и подготовки кожи

  1. Положите крысу в индукции камеры установки анестетика и администрирование 4% изофлурана с 1L/min O 2 для2-3 мин, чтобы вызвать анестезию. Снимите наркозом крыса из камеры и поместить его на спине на чистые, с подогревом мат. Поддерживать изофлурана на 1,5% при использовании носового конуса. Применить lacrilube или подобным средством для предотвращения роговицы во время процедуры. Выполните ноги-Pad щепотку испытание для обеспечения животного адекватно наркоз перед началом работы. Повторите это последний тест перед каждым важным шагом в порядке и отрегулировать концентрацию ингаляционного анестетика соответственно.
  2. Тесно брить передней брюшной использовании электрическая бритва, так что весь брюшную поверхность подвергается. Нанести крем для удаления волос в течение рекомендованных поставщиком. Снимите сливки и тщательно промыть кожу с подогреваемой стерильным физиологическим раствором, чтобы удалить все следы крема. Нанести 2% раствор хлоргексидина в 70% изопропилового спирта на кожу и дайте высохнуть, прежде чем продолжить. Это стандартная подготовка кожи в нашем отделении на основе имеющихся данных для хирургической инфекции. Пожалуйста D 34iscuss с Департаментом ветеринарии, что является стандартной процедурой в вашем подразделении До выборов протокол подготовки кожи.
  3. Место 2 шторы обе стороны от крыс и заботиться, чтобы держать их стерильными. Наденьте стерильные перчатки и с помощью помощника открыть стерильной упаковке. Поместите все инструменты на одном драпировку и швов, марля, хлопок аппликаторы, силиконовая пленка и стерильных маркером с правителем, с другой.
  4. Определить среднюю линию использованием мечевидного отростка и хвост в качестве ориентиров. Отметить средней линии. Измерьте 0,8 см ниже мечевидного отростка и отметьте эту точку. Нарисуйте линии, перпендикулярной к средней линии от этой точки. Принимая средней линии в качестве центра лоскута знак из 1 см и 2 см слева и справа от средней линии. Рисовать вертикальные линии, параллельные срединной линии из точек. Мера 4 см ниже горизонтальной линии оригинальной и взять еще одну параллельно ей. Следуя этим инструкциям 4 х 4 см лоскут разделить на 4 равные полоски очерчена(См. Рисунок 2).

3. Лазерная допплера

  1. Осторожно переместите крысы носовой конус второй буровой установки анестетика на сканере ЛДИ. Продолжить анестезией 1,5% изофлураном 1L/min O 2. Включите лазерный и следуйте инструкциям производителя, чтобы начать сканирование. После сохранения отсканированных файлов вернуть крысу обратно к первой буровой установки и вставьте ректального датчика из теплокровного одеяло использованием мягкого белого парафина в качестве смазки.

. 4 На месте лоскут трамвай - мышечно-кожный модели IRI

  1. Re-скраб руки и надеть стерильные перчатки свежим. Вырезать 5 см в диаметре круг в центре оставшейся стерильной драпировки и поместите над открытыми живота, чтобы создать драпированными стерильного поля.
  2. Сделать разрез вниз по левой боковой отмечены кромки (Фиг.3А и В). Гемостаза. Делайте аналогичные разрезы вниз горизонтальные линиислева от средней линии. Гемостаза.
  3. Жир, покрывающий левой нижней влагалища прямой мышцы живота должны быть видны. Использование щипцов и тонких ножниц Iris тщательно получить под этим жиром. Будьте осторожны, чтобы не повредить перфораторы, проходящий через левую, переднюю влагалища прямой мышцы живота. Самолет, открывающиеся при таком вскрытия является то, что непосредственно над передней брюшной фасции стене. Продолжить рассекает в этой плоскости вокруг огороженного поля. В левой подвздошной ямке лежит большой, поверхностный подвздошных сосудов циркумфлексом-они могут быть связаны или обезболивающий укол. Тогда расширить вскрытие медиально с осторожностью и только по мере латерального края левой прямой мышцы. Существует очевидное изменение цвета в этой точке от розового до почти белого (рис. 3в). Тщательно орошать площадь стерильным физиологическим раствором и убедитесь, что гемостаз был достигнут прежде, чем поместить влажной марлей над этим районом.
  4. Повторите процедуру на противоположной стороне, но на этот раз расширить тØ белой линии (средней линии). Позаботьтесь, чтобы определить и прижечь все мышечно перфораторы, возникающие в центре правой прямой мышцы живота (рис. 3D). Если это не будет сделано должным образом, это может привести к послеоперационной гематомы и ложным результатам. Аналогично гемостаза, орошение и поместить влажной марлей над поднятым клапаном.
  5. Вернуться на нижний край левой передней мышце (рис. 3E и F). Cauterize самых уступает перфоратора видел. Перейдите к вырезать небольшой (около 0,6 см х 0,6 см) окна в передней влагалища прямой мышцы живота использованием microscissors изогнутые и заостренные Греффе щипцов. Блант рассекать медленно вниз латерального края мышцы, пока мышцы не редеет, но перед задней оболочка нарушена. Затем поверните щипцами и тупые рассекать медиально, пока живот мышцы не на вершине изогнутый край пинцетом и советы бесплатно на медиального края. Кормить приблизительноеLY 6 см 5-0 Ethilon в пасть щипцов и галстук от нижней влагалища прямой мышцы живота. По завершении этого этапа мышечно-кожный лоскут изолирован на одной доминирующей судно-глубокая Улучшенный эпигастральной судов. Накрыть влажной марлей.
  6. Разрежьте силиконовой пленкой в овалы с гладкими углами, (рис. 3G). Они должны быть достаточно большими, чтобы покрыть большую часть области подвергается под fasciocutaneous части лоскута. Тем не менее, должны быть предприняты меры для того, чтобы края кожи могут быть закрыты без всякого напряжения и медиальной кривой овала, возможно, придется работать в паре обратно, чтобы предотвратить его ухудшая поток через оставшиеся перфораторы. Затем они пришивают в месте с 6-0 Vicryl (рис. 3Н). Накрыть влажной марлей.
  7. Используя простые Прерванная жизнь "подыхать" 5-0 Ethilon швов лоскут, чтобы уменьшить огонь и потери воды (рис. 3I). Накрыть влажной марлей.
  8. Расширение рану сверху слевамечевидного отростка (рис. 3I). Шовный этом в верхний левый квадрант для улучшения поля обзора.
  9. Срежьте жир любые вышележащих выявить начальника, левой, передней влагалища прямой мышцы живота. Отрежьте небольшой (0,6 см х 0,6 см) окно в этой оболочке (рис. 3J). Выдвигайте рану медиально До внесения изменений в мышечном волокне траектории с вертикальной на косые и последовательности из плотно упакованных фибрилл потерять видно.
  10. Вставьте изогнутых щипцов тщательно между этими двумя мышцами и открыть плоскости путем отслаивания. Аккуратно вырежьте вниз только постольку, поскольку преимущественный поверхности этих пинцетов, проходящем через живот левой прямой мышцы живота, чтобы выявить основные глубокие, Улучшенный эпигастральной артерии и вену (рис. 3K).
  11. Использование микро-инструментов и высокая мощность на операционный микроскоп, осторожно отделите артерию и вену и сдирать любой окружающий жир.
  12. Применить атравматическую зажимы Acland кrtery и вены (Б-1, "V" тип) и включите таймер обратного отсчета 30 мин ишемического периода. Промывать зажатой ножки и накрыть марлей. Мы не использовали судно расширители, такие как верапамил или pabavarine но должно судна спазм быть проблемой, эти препараты должны быть рассмотрены.
  13. Администрирование бупренорфин (0,04 мг / кг) и нагретого, стерильный физиологический раствор (1 мл / кг / час).
  14. Начиная с верхнего левого угла, шовный лоскут на место с 6-0 Vicryl подкожные швы остановки и связывая НА мечевидного отростка.
  15. Когда 30 мин ишемии закончена, аккуратно снимите зажимы и орошать ножки подогретым раствором. Убедитесь, что поток был восстановлен. Пожалуйста, обратите внимание, что это время ишемии было обусловлено Управления Управления Великобритании Home. Исследователи, работающие в других властей может быть в состоянии увеличить это время. Продление ишемии, вероятно, приведет к ухудшению клинических исходов.
  16. Шовный разреза края прямой мышцы на место с 6-0 Vicryl.Будьте осторожны, чтобы не применять слишком много напряжения, так как это может привести к перекручивание сосудов.
  17. Завершите ушивание подкожного заботясь, чтобы похоронить всех узлов под кожей (рис. 3K).
  18. Очистить рану области и дайте ему высохнуть. Перерисовать зон на клапане.
  19. Повторное сканирование животных, чтобы получить послеоперационные изображения.
  20. Повторно применять lacrilube в глаза животного и место в нагретом инкубатор (37 ° С) в течение 1 часа для восстановления перед возвращением в хозяйстве устройства.

Критические шаги в протоколе

Суть процедуры заключается в выявлении глубоких, Улучшенный эпигастральной судов. Это четко показано в прилагаемой пленкой. Короче говоря, окна режется в передних влагалища прямой мышцы живота, чтобы выставить основные мышечные волокна, которые будут продольно. Расширяя Поверхностное рассечение передней влагалища прямой мышцы живота медиально изменение траектории волокна мышц наблюдается FROM продольное косой. Вставьте тупыми концами, изогнутые, Греффе щипцы (или аналогичный) на пересечении этих двух пучков мышечных волокон. Блант рассекают поперечно. Сократите, с использованием микро ножницы, на верхней поверхности изогнутых щипцов, проведенных в этой плоскости между пучками мышечных волокон. После снятия Греффе щипцы глубокие, Улучшенный эпигастральной артерии и вены будет наблюдаться в середине мышцы живота прямая теле. Сдирать жир, покрывающий сосуды с использованием микро инструментами и применять зажимы.

Fasciocutaneous части лоскута ТРАМВАЙ крысы достаточно тонкие, чтобы разрешить лоскут взять в качестве полноправного кожного трансплантата толщины. Чтобы избежать этого и обеспечить, чтобы это истинная модель IRI тонкий, гибкий лист кремния находится под fasciocutaneous части лоскута. 35 Этот шаг был принят другими исследователями проведения модели крысы трамвае. 17,21,25

Крысы жевать ThrouGH узлов поэтому убедитесь, что все швы и все подкожные узлы похоронены. При проведении тщательной autocannabilism ушивание закрылков, как сообщали другие исследователи можно избежать. +24

После отправления бупренорфин снизить эксплуатационные анестезии до 1% Isoflurane (1L/min O 2).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Крысы модели более экономичны, чем более крупных животных моделях, 36 являются устойчивых к болезням в природе и могут быть генетически манипулировать. Свободные кожей животных, таких как грызуны, как считалось, различное расположение кожных кровоснабжение по сравнению с фиксированной кожей животных, таких как люди и свиньи. В свободной кожей животных, кожу подается в первую очередь по прямой кожных сосудов, проходящих через подкожный жир в вышележащих кожи (рис. 4) В отличие от этого, закрепленный кожу животных получают кожных кровоснабжение через сосуды, конечно через основные мышцы для снабжения вышележащих покровов через мышечно перфораторы (рис. 4). Поэтому были опасения ли свободные кожей животных могут быть использованы в исследованиях лоскута. Тем не менее, работы Тейлора на angiosomes показал, что был осторожным областей кожи крысы, которые поставляются в аналогично тому, как люди через мышечно перфораторов.передней брюшной стенке, на которой мышечно-кожный поперечной мышце (трамвай) лоскут основана является одной из таких областей. 37,36,15

Соответствующие анатомии

Улучшенный, глубокий, эпигастральной судов являются доминирующими сосудистой ножке у крыс и от шести до десяти перфораторы проходят через переднюю влагалища прямой мышцы живота на поставку вышележащих покровов. 13,15 Улучшенный глубокой эпигастральной судов у крыс введите прямая мышца живота на уровне из мечевидного и продолжить, уменьшаясь в калибре, к лобку. Боковые края передней брюшной полости снабжены поверхностным низшие и высшие эпигастральной и огибающая подвздошных сосудов. 37 Существует физиологическая перекрытия между территориями, поставляемые этими прямыми кожных ветвей и в те районы покровов поставляемые мышечно перфораторы через дроссель сосудов. Это 38 согласуется с анатомической и физиологической сосудистой территорийописанные в человеческом, хотя в человеческом доминирующей сосудистой ножке является нижней, а не Улучшенный эпигастральной артерии. 39

Поперечные прямая мышца живота мышечно-кожный (трамвай) лоскут

Поперечный лоскут живота прямая была впервые описана на реконструкцию после радикальной резекции молочной железы в 1974 году. 40 мышечно-кожный лоскут Это основывается на глубоком эпигастральной кровеносных сосудов и включает в себя часть прямой мышцы живота и мышцы вышележащих покровов. В этой статье трамвай лоскут будет разделен на четыре равные области, называемые зонами. Они пронумерованы I-IV согласно Schlefen и др. так, что: зона I (ZI) является покровом вышележащих прямая мышца живота, непосредственно сообщенные сосудистой ножке; Зона II (ZII) описывает покровом вышележащих контралатеральную живота прямая; Зоны. III (ZIII) площадь сбоку от зоны I и IV зоны (ZIV) площадь сбоку от зоны II (см. 41

Лазерная допплер-оценки перфузии крови

Лазерной доплеровской визуализации обеспечивает неинвазивный способ оценки кровотока в лоскут. 42-45 монохроматического источника света излучается от лазерной головки. Это падающего света (синяя на рисунке 6) сдвигается на эритроциты в ткани. Степень сдвига связана со скоростью эритроцитов. Сдвинуты (зеленый на фиг.6) детектируется фотодетектором в головной части сканера и преобразуется в измерении перфузии. Они приведены в условных единицах, перфузии единиц (PU), и данные преобразуются в изображение, так же, как где перфузии карта погоды оценивается от высоких к низким и каждое значение, присвоенное цвет (рис. 7). Цветовая карта генерируется иллюстрирует относительную перфузии между различными областями лоскута. Каждый инструмент тщательно продуманы СуCH, что сравнение может быть сделано между субъектами, когда тот же сканер используется

Крысы прошли лазерного доплеровского перфузии использованием Moor LD12 (Moor Instruments, Essex, UK), сканер до операции, сразу после операции и через 24 и 48 ч после хирургии.

С помощью программного обеспечения, поставляемого со сканером ЛДИ области интереса (ROI) могут быть наложены на изображение ЛДИ и средний перфузии этой области рассчитаны (рис. 7).

Изображение J анализ процент площади некроза первичной конечной мерой

Изображение J находится в открытом доступе обработки изображений программа любезно Национального института Health.46 Это может быть использовано для измерения областей, а затем вычислить процент площади кожи каждой зоны, которая является нормальным или полностью некрозной в каждый момент времени (фиг. 8) .

Оценка травмы

высокие темпы некроз кожи были обнаружены в зоне IV (см. репрезентативные данные на рисунках 9 и 10) согласуется с другими исследованиями. 16,22,24,25,47 Эти выводы совпадают с узором некроза сообщили клинически в человеческой закрылки ТРАМВАЙ, подтверждающий, что это точное представление клинической проблемой. Всего 14 процент площади некроза лоскута была 37,86 ± 5,4% (среднее ± SEM).

Изменения в крови кожи

ЛДИ перфузии сканирования была использована для оценки кровотока в модели лоскут трамвае. Это простой, неинвазивный и воспроизводимые средства оценки перфузии (рис. 9 и 11). Перфузии снизилось до 58,4 ± 0,49% (n = 10, среднее ± SEM) немедленно после операции, 56,98 ± 0,41% через 24 ч и 92,4 ± 0,6% по сравнению с дооперационной значения для всей лоскута. Областях лоскута Wi го низкой перфузии в раннем послеоперационном и 24 сканирований HR укажите области, некрозом впоследствии развиваются через 48 часов (см. рисунок 9).

Рисунок 1
Рисунок 1. Установка оборудования. Установки анестетика с красным камеры индукционные видно за столом. Крыса, лежащим на спине с анестезией поддерживается через носовой конус. Нагревательную лампу используют для увеличения температуры окружающей среды. Над крыса операционным микроскопом. Слева от крысы стерильной драпировки марлей, швов и т.д. В правой части крыса стерильной драпировки с хирургическими инструментами. Внутренняя температура поддерживается с использованием теплокровного одеяло (под крыса) и ректальный зонд, соединенный с устройством Harvard Apparatus (черный ящик в передней части бен острых предметов).

/ 50473/50473fig3.jpg "Alt =" Рисунок 3 "/>
Рисунок 2. Разметка лоскут границ и зон. Депилированной крысу помещают спине. Средней линии определены и обозначены (синяя пунктирная линия). Строка отмечается перпендикулярной к средней линии 0,8 см ниже мечевидного отростка. 4 линии проводятся параллельно средней линии, 1 см друг от друга. Последняя строка, направленный параллельно и на 4 см ниже второй линии для завершения площади. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .

Рисунок 4
Рисунок 3. Шаг за шагом хирургический подход. Лоскута очерчена как описано ранее (3А). Левый боковой край надрезают (3В) и рассечение продлена медиально в PLАНХ немедленно поверхностным фасции передней брюшной стены латерального края левой мышце (3C). Аналогичные действия проводятся на противоположной стороне, но вскрытие продлена медиально к белой линии (средней линии), (3D). Прижечь мышечно перфораторы, возникающие от центра правой прямой мышцы живота. Небольшое окно разрезать как нижняя часть левого влагалища прямой мышцы живота (3E) и нижний мускул перевязывают (3F). Силиконовая пленка затем разрезают и зашивают на месте под fasciocutaneous части лоскута (3G H). Лоскут затем 'привязана' из (3-я). Стадии (3G и I) может быть выполнена до или после стадии (3E и F). Небольшое окно разрезается верхней частью левой, передней влагалища прямой мышцы живота (3-J). Подвергаются мышцы затемтщательно изучены. Изменения в мышечной траектории волокна из параллельной косой и плотно упакованы в неплотно упакованные фибриллы будет видно медиально. Передайте пинцетов Греффе между этими самолетами мышц и тупые рассекать боков. Сократить на замкнутое, верхняя поверхность этих щипцов, чтобы разоблачить сосудистой ножке. Удалить близлежащий жир и подвергать сосуды для зажима. Наведите Acland зажимы на артерии и вены (3K) и отсчитывать ишемического периода времени. Начать подкожный ушивание покинуть зону непосредственно над зажимами до последнего. Удалить зажимы после выделенного периода и соединять свободные концы левой мышцы живота. Завершите подкожных швов (3 л).

Рисунок 5
Рисунок 4. Кожные кровоснабжения фиксированной и свободной кожей животных. Кожные кровоснабжение в туалетахэлектронной кожей млекопитающих, таких как крысы, в основном через прямые кожные ветви, а не мышечной перфораторы как в основной кожи млекопитающих, таких как люди и свиньи. По этой причине крыс исторически не были благоприятствования для пластиковых хирургических исследований. Это было показано, что устаревшее понятие и конкретных областях, таких как крысы передней брюшной стенки снабжены мышечно перфораторы и поэтому подходящие районы использовать для крышки моделей. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .

Рисунок 6
Рисунок 5. Зон поперечных мышечно-кожный лоскут живота, как описано Schlefen соавт. В 1983 году. Красный стрелка указывает на сосудистой ножке (в данном случае левой, улучшенные, глубоко в эпигастрии сосудов). Синие римские цифры показывают Tон 4 зоны пронумерованных I-IV на основе их положения относительно сосудистую ножку так, что: Зона I (ZI) является покрывающей покровов прямой мышцы живота, непосредственно подаваемый на сосудистой ножке; Зона II (ZII) описывает покровов вышележащих контралатеральной прямая мышца живота; Зона III (ZIII) площадь сбоку от зоны I и IV зоны (ZIV) сбоку от зоны II.

Рисунок 7
Рисунок 6. Лазерный доплеровский сканер изображений. Moor LD12 сканер оценивает перфузии, разослав монохроматического света (синие стрелки) источники, которые сдвинут на движущихся эритроцитов в кожу. Степень сдвига связана со скоростью эритроцитов. Это смещается света (зеленые стрелки) обнаруживается фото-сканер и перфузии в этой области рассчитаны. Зеркало перемещает луч в последовательном порядке так, что весь передней брюшной стенки может бытьотсканированы примерно 7 мин.

Рисунок 2
Рисунок 7. Оценка средней перфузии ЛДИ использованием программного обеспечения. Выберите многоугольник значок на панели инструментов (красная стрелка), то область интереса (ROI) Selection Tool (прямоугольник с синим крестом, 2 иконки справа от Polygon Tool). С помощью мыши обведите ROI, на этом рисунке все 4 зоны будут помечены. Перед тем как перейти к следующему ROI нажмите на прямоугольник с синим квадратом снова. После того как все нужные трансформирования выбираются нажмите значок статистики в центре панели инструментов (значок блокнот с номерами на нем) и среднюю статистику перфузии для каждого ROI всплывет в новом окне, как показано на рисунке.

Рисунок 8. Анализ изображений J.

> Рисунок 8-1
Рисунок 8-1. Изображение J-Select линейным инструментом. Выберите прямую строки, нарисуйте линию по центру лоскута, как показано. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .

Рисунок 8-2
Рисунок 8-2. Изображение J-Set масштабе 1. Выберите Анализ на панели инструментов и из выпадающего меню выберите задать масштаб. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .

upload/50473/50473fig8-3.jpg "Alt =" 8-3 "FO: Content-ширина =" 5 дюймов "FO: SRC =" / files/ftp_upload/50473/50473fig8-3highres.jpg "/>
8-3. Изображение J-Set масштабе 2. Во всплывающем окне установить шкалу на 4 см. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .

Рисунок 8-4
Рисунок 8-4. Изображение J-Выберите инструмент Polygon Tool & контур зоны интереса. Выберите инструмент Polygon Tool (выделена иконка) и наметить зоны интереса. Всему периметру зоны IV изложена в этом примере. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .

сегда "> Рисунок 8-5
Рисунок 8-5. Изображение J-Measure области 1. Выберите Анализ на панели инструментов и в выпадающем меню выберите Измерить. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .

Рисунок 8-6
Рисунок 8-6. Изображение J-Измерение площади 2. Область будет отображаться в отдельном окне результатов. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .

ПГ "Alt =" Рисунок 8-7 "FO: Content-ширина =" 5 дюймов "FO: SRC =" / files/ftp_upload/50473/50473fig8-7highres.jpg "/>
Рисунок 8-7. Изображение J-Повторите эти действия для полной площади некроза. Повторите 2 предыдущих шагов, но на этот раз только наметить некрозной области. Этот пример показывает полный некроз в зоне IV изложены. Чтобы вычислить процент площади полного некроза разделить последнее значение бывшим и умножить на 100. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .

Рисунок 9
Рисунок 9. Монтаж Представитель изображения этой процедуры Надпись:. Каждая строка представляет собой другая тема. Фотографии (слева) и соответствующее изображение ЛДИ (справа) показаны в 4 различные моменты времени (от Лефут направо: до операции, после операции, через 24 часа и через 48 часов после операции). Очевидно, что некроз происходит последовательно в зонах ZIV и III. Цветовая шкала в правом нижнем углу показывает цвета и соответствующие им единицы перфузии. Красные высокие перфузии, сине-низкой перфузии). Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .

Рисунок 10
Рисунок 10. Типичные результаты-некроза кожи, выраженное в процентах от общей площади лоскута на 48 часов Надпись:. Процент область полный некроз лоскута оценивали клинически и измеряется с использованием программного обеспечения изображения J через 48 часа. Среднее и SEM показали, п = 10.

Рисунок 11
Рисунок 11. Репутацияставителем результаты лазерной доплеровской визуализации Надпись:. лазерной доплеровской визуализации, чтобы показать средняя перфузия измеряется в единицах перфузии лоскута в контрольной группе до операции, после операции, через 24 и 48 часа. Среднее и SEM показали, п = 10.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Изменения и устранения неисправностей

Протокол, представленные здесь воспроизводит IRI видно на свободный перевод ткань в экспериментальной системы, позволяющей дальнейшего понимания этого процесса и обеспечивает возможность исследовать средство ослабления IRI и улучшения результата. Это может быть легко модифицирована для получения более серьезных травм его были основаны на недоминантную, глубоко, нижней эпигастральной ножке или если время ишемии были увеличены.

Ограничения технику

Передней брюшной стенки крыс значительно меньше подкожного жира, чем передней брюшной стенки большинства женщин проходит трамвай лоскутная операция по реконструкции груди. Модель, представленная в этом тексте разработан специально в качестве модели ишемии реперфузионных повреждений в мышечно-кожный клапана так, что последствия предварительной терапии могут быть оценены с использованием некроз кожи и перфузии как результат мер.процедуры, описанной в этой статье конкретно не модельных задач, таких как некроз жировых клеток, которые понесены в человеческой закрылки трамвае, когда закрылки со значительными жировыми компонентами преднамеренно собран для создания проекции для больших реконструкций груди.

Прямая в естественных условиях наблюдения микроциркуляцию не демонстрируется в этом протоколе, но была описана в модели кремастер мышцы 48 и в osteomyocutaneous лоскута. 7,49-51 трамвай модели мышечно-кожный лоскут модель, если исследователи особенно заинтересованы в osteomyocutaneous клапаны эта модель не является целесообразным, но альтернативной модели были описаны в литературе. 50

Значение по отношению к другим методам

Большинство опубликованных моделей крысы ТРАМВАЙ использовать прямая мышца живота окружающих выбранную сосудистой ножке в качестве носителя для сосудистой ножке. 13-22,24,25 Они не Точностьurately отражают IRI как клапан никогда не подвергается истинный период ишемии и реперфузии. Таким образом, по сравнению с этих работах модели, описанные в этом протоколе дает воспроизводимые, мышечно-кожный контролируемого ИРИ. Исследователи провели также это как свободным лоскутом в пах 23 судов, однако это технически очень сложной как глубокие начальника, эпигастральной артерии и вены мера 0,45 и 0,5 мм соответственно. Этот протокол представляет собой более простую модель.

Будущие приложения

Исследования в улучшении результата в бесплатный трансфер ткань сосредоточена главным образом на предварительной подготовки стратегий. Эти стратегии используются или начато до операции с целью «обучения» передается ткани выдерживать лучше бесплатные операции передачи ткани, и это улучшение исхода. Есть два основных способа, которыми это может быть достигнуто:. Фармакологических или ишемического прекондиционирования 52 много этой работыбыли выполнены на свиней, которые являются более дорогими в доме и труднее работать, чем с крысами. Протокол, описанный в этой статье может быть использован для тестирования этих стратегий в лаборатории животное, которое легко дому и работать, и в котором есть возможность работать с генетически модифицированных животных.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

У нас нет раскрытий.

Acknowledgements

Эта работа финансировалась Советом медицинских исследований грант G1000299.

Соответствующий автор хотел бы поблагодарить Гэри Borthwick, Эдинбургский университет, для оказания помощи во время операции.

Авторы хотели бы выразить признательность советы от Хелен Дуглас и Иэн Маккей и позволяет нам наблюдать их глубокой нижней эпигастральной (DIEP) лоскутная процедура (Canniesburn пластической хирургии группы, Королевской больницы Глазго, 84 Castle Street, Глазго G4 0SF, Великобритания).

Авторы также хотели бы поблагодарить Гэри Блэки в Университете Эдинбурга за помощь в создании клипа на эту статью.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Moor LD12 laser doppler imaging scanner http://gb.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8
Complete homeothermic blanket system with flexible probe. Small. 230 VAC, 50 Hz 507221F www.harvardapparatus.com
Graeffe forceps 0.8 mm tips curved 11052-10 2, http://www.finescience.de
Acland clamps 00398 V B-1 ’V’ pattern clamps used on both artery and vein. http://www.merciansurgical.com/acland-clamps.pdf
Clamp applicator CAF-4 http://www.merciansurgical.com/acland-clamps.pdf
Gemini cautery unit 726067 www.harvardapparatus.com
Micro-vessel dilators 11 cm 0.3 mm tips 00124 D-5a.2 http://www.merciansurgical.com
Micro Jewellers Forceps 11cm angulated 00109 JFA-5b http://www.merciansurgical.com
Micro Jewellers Forceps 11 cm straight 00108 JF-5 http://www.merciansurgical.com
Acland Single Clamps B-1V (Pair) 396 http://www.merciansurgical.com
Micro Scissors Round Handles 15 cm Straight 67 http://www.merciansurgical.com
Iris Scissors 11.5 cm Curves EASY-CUT EA7613-11 http://www.merciansurgical.com
Mayo Scissors 14 cm Straight Chamfered Blades EASY-CUT EA7652-14 http://www.merciansurgical.com
Derf Needle Holders 12 cm TC 703DE12 http://www.merciansurgical.com
Ethilon 5-0 W1618 http://www.farlamedical.co.uk/
Vicryl rapide 6-0 W9913 http://www.millermedicalsupplies.com/
Instrapac - Adson Toothed Forceps (Extra Fine) 7973 http://www.millermedicalsupplies.com/
Castroviejo needle holders 12565-14 http://s-and-t.ne
Heat Lamp http://www.chicken-house.co.uk
Silicone sheeting 0.3 mm translucent http://www.silex.co.uk/
Image J software http://rsbweb.nih.gov/ij/
Zeiss OPMI pico http://www.zeiss.co.uk/
Operating microscope
Vet tech solution isofluorane rig http://www.vet-tech.co.uk/
Vet tech solution isofluorane rig http://www.vet-tech.co.uk/

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Wang, X., et al. Free anterolateral thigh adipofascial flap for hemifacial atrophy. Ann. Plast. Surg. 55, (6), 617-622 (2005).
  2. Eckardt, A., Fokas, K. Microsurgical reconstruction in the head and neck region: An 18-year experience with 500 consecutive cases. J. Cranio. Maxill. Surg. 31, (4), 197-201 (2003).
  3. Yazar, S., et al. Safety and reliability of microsurgical free tissue transfers in paediatric head and neck reconstruction - a report of 72 cases. J. Plast. Reconstr. Aes. 61, (7), 767-771 (2008).
  4. Blondeel, P. N., Landuyt, K. H. V., Monstrey, S. J. Surgical-technical aspects of the free diep flap for breast reconstruction. Operat. Tech. Plast. Reconstr. Surg. 6, (1), 27-37 (1999).
  5. Siemonow, M., Arslan, E. Ischaemia/reperfusion injury: A review in relation to free tissue transfers. Microsurgery. 24, 468-475 (2004).
  6. Wang, W. Z. Investigation of reperfusion injury and ischaemic preconditioning in microsurgery. Microsurgery. 29, 72-79 (2009).
  7. Rucker, M., et al. Reduction of inflammatory response in composite flap transfer by local stress conditioning-induced heat-shock protein 32. Surgery. 129, (3), 292-301 (2001).
  8. Cetinkale, O., et al. Involvement of neutrophils in ischemia-reperfusion injury of inguinal island skin flaps in rats. Plast. Reconstr. Surg. 102, (1), 153-160 (1998).
  9. Korthuis, R. J., Granger, D. N., Townsley, M. I., Taylor, A. E. The role of oxygen-derived free radicals in ischemia-induced increases in canine skeletal muscle vascular permeability. Circ. Res. 57, (4), 599-609 (1985).
  10. Eisenhardt, S. U., et al. Monitoring molecular changes induced by ischemia/reperfusion in human free muscle flap tissue samples. Ann. Plast. Surg. 68, (2), 202-208 (2012).
  11. Dragu, A., et al. Gene expression analysis of ischaemia and reperfusion in human microsurgical free muscle tissue transfer. J. Cell. Mol. Med. 15, (4), 983-993 (2011).
  12. Tilgner, A., Herrberger, U. [myocutaneous flap models in the rat. Anatomy, histology and preparation technic of the myocutaneous rectus abdominis flap]. Z. Versuchstierkd. 29, (5-6), 231-236 (1987).
  13. Dunn, R. M., Huff, W., Mancoll, J. The rat rectus abdominis myocutaneous flap: A true myocutaneous flap model. Ann. Plast. Surg. 31, (4), 352-357 (1993).
  14. Clugston, P. A., Perry, L. C., Fisher, J., Maxwell, G. P. A rat transverse rectus abdominis musculocutaneous flap model: Effects of pharmacological manipulation. Ann. Plast. Surg. 34, (2), 154-161 (1995).
  15. Ozgentas, H. E., Shenaq, S., Spira, M. Development of a tram flap model in the rat and study of vascular dominance. Plast. Reconstr. Surg. 94, (7), 1012-1017 (1994).
  16. Doncatto, L. F., da Silva, J. B., da Silva, V. D., Martins, P. D. Cutaneous viability in a rat pedicled tram flap model. Plast. Reconstr. Surg. 119, (5), 1425-1430 (2007).
  17. Lineaweaver, W. C., et al. Vascular endothelium growth factor, surgical delay, and skin flap survival. Ann. Surg. 239, (6), 866-873 (2004).
  18. Rezende, F. C., et al. Electroporation of vascular endothelial growth factor gene in a unipedicle transverse rectus abdominis myocutaneous flap reduces necrosis. Ann. Plast. Surg. 64, (2), 242-246 (2010).
  19. Zacchigna, S., et al. Improved survival of ischemic cutaneous and musculocutaneous flaps after vascular endothelial growth factor gene transfer using adeno-associated virus vectors. Am. J. Pathol. 167, (4), 981-991 (2005).
  20. Zhang, F., et al. Improvement of skin paddle survival by application of vascular endothelial growth factor in a rat tram flap model. Ann. Plast. Surg. 46, 314-319 (2010).
  21. Hijjawi, J., et al. Platelet-derived growth factor β, but not fibroblast growth factor 2, plasmid DNA improves survival of ischemic myocutaneous flaps. Arch. Surg. 139, (2), 142-147 (2004).
  22. Wong, M. S., et al. Basic fibroblast growth factor expression following surgical delay of rat transverse rectus abdominis myocutaneous flaps. Plast. Reconstr. Surg. 113, (7), 2030-2036 (2004).
  23. Zhang, F., et al. Microvascular transfer of the rectus abdominis muscle and myocutaneous flap in rats. Microsurgery. 14, (6), 420-423 (1993).
  24. Hallock, G. G., Rice, D. C. Comparison of tram and diep flap physiology in a rat model. Plast Reconstr Surg. 114, (5), 1179-1184 (2004).
  25. Qiao, Q., et al. Patterns of flap loss related to arterial and venous insufficiency in the rat pedicled tram flap. Annals of Plastic Surgery. 43, (2), 171 (1999).
  26. Persy, V. P., Verhulst, A., Ysebaert, D. K., De Greef, K. E., De Broe, M. E. Reduced postischemic macrophage infiltration and interstitial fibrosis in osteopontin knockout mice. Kidney Int. 63, (2), 543-553 (2003).
  27. Li, Y., et al. Overexpression of cgmp-dependent protein kinase i (pkg-i) attenuates ischemia-reperfusion-induced kidney injury. Am. J. Physiol. Ren. Physiol. 302, (5), 561-570 (2012).
  28. Hunter, J. P., et al. Effects of hydrogen sulphide in an experimental model of renal ischaemia-reperfusion injury. Brit. J. Surg. 99, (12), 1665-1671 (2012).
  29. Hamada, T., Fondevila, C., Busuttil, R. W., Coito, A. J. Metalloproteinase-9 deficiency protects against hepatic ischemia/reperfusion injury. Hepatology. 47, (1), 186-198 (2008).
  30. Duarte, S., Hamada, T., Kuriyama, N., Busuttil, R. W., Coito, A. J. Timp-1 deficiency leads to lethal partial hepatic ischemia and reperfusion injury. Hepatology. 56, (3), 1074-1085 (2012).
  31. Shen, X. D., et al. Cd154-cd40 t-cell costimulation pathway is required in the mechanism of hepatic ischemia/reperfusion injury, and its blockade facilitates and depends on heme oxygenase-1 mediated cytoprotection. Transplantation. 74, (3), 315-319 (2002).
  32. Liu, J., et al. Endoplasmic reticulum stress modulates liver inflammatory immune response in the pathogenesis of liver ischemia and reperfusion injury. Transplantation. 94, (3), 211-217 (2012).
  33. Pan, G. Z., et al. Bone marrow mesenchymal stem cells ameliorate hepatic ischemia/reperfusion injuries via inactivation of the mek/erk signaling pathway in rats. J. Surg. Res. 178, (2), 935-948 (2012).
  34. Darouiche, R. O., et al. Chlorhexidine-alcohol versus povidone-iodine for surgical-site antisepsis. New. Engl. J. Med. 362, (1), 18-26 (2010).
  35. Fukui, A., Inada, Y., Murata, K., Tamai, S. Plasmatic imbibition" in the rabbit flow-through venus flap, using horseradish peroxidase and fluoroscein. J. Reconstr. Mirosurg. 11, 255-264 (1995).
  36. Dunn, R. M., Mancoll, J. Flap models in the rat: A review and and reappraisal. Plast. Reconstr. Surg. 90, (2), 319-328 (1992).
  37. Taylor, G., Minabe, T. The angiosomes of the mammals and other vertebrates. Plast. Reconstr. Surg. 89, (2), 181-215 (1992).
  38. Taylor, G., Corlett, R., Boyd, J. The versatile deep inferior epigastric (inferior rectus abdominis) flap. Brit. J. Plast. Surg. 37, (3), 330-350 (1984).
  39. Taylor, G., Corlett, R., Boyd, J. The extended deep inferior epigastric flap: A clinical technique. Plast. Reconstr. Surg. 72, (6), 751-765 (1983).
  40. Tai, Y., Hasegawa, H. A tranverse abdominal flap for reconstruction after radical operations for recurrent breast cancer. Plast. Reconstr. Surg. 53, (1), 52-54 (1974).
  41. Scheflan, M., Dinner, M. I. The transverse abdominal island flap: Part i. Indications, contraindications, results, and complications. Ann. Plast. Surg. 10, 24-35 (1983).
  42. Tindholdt, T. T., Saidian, S., Pripp, A. H., Tonseth, K. A. Monitoring microcirculatory changes in the deep inferior epigastric artery perforator flap with laser doppler perfusion imaging. Ann. Plast. Surg. 67, (2), 139-142 (2011).
  43. Tindholdt, T. T., Saidian, S., Tonseth, K. A. Microcirculatory evaluation of deep inferior epigastric artery perforator flaps with laser doppler perfusion imaging in breast reconstruction. J. Plast. Surg. Hand. Surg. 45, (3), 143-147 (2011).
  44. Booi, D. I., Debats, I. B. J. G., Boeckx, W. D., van der Hulsi, R. R. W. J. A study of perfusion of the distal free-tram flap using laser doppler flowmetry. J. Plast. Reconstr. Aes. 61, 282-288 (2008).
  45. Hallock, G. G. Physiological studies using laser doppler flowmetry to compare blood flow to the zones of the free tram flap. Ann. Plast .Surg. 47, (3), 229-233 (2001).
  46. Collin, T. Image j for microscopy. Biotechniques. Suppl. 43, (1), 25-30 (2007).
  47. Hallock, G., Rice, D. Physiologic superiority of the anatomic dominant pedicle of the tram flap in a rat model. Plast. Reconstr. Surg. 96, 111-118 (1995).
  48. Ozmen, S., Ayhan, S., Demir, Y., Siemionow, M., Atabay, K. Impact of gradual blood flow increase on ischaemia-reperfusion injury in the rat cremaster microcirculation model. J. Plast. Reconstr. Aes. 61, (8), 939-948 (2008).
  49. Rucker, M., Vollmar, B., Roesken, F., Spitzer, W. J., Menger, M. D. Microvascular transfer-related abrogation of capillary flow motion in critically reperfused composite flaps. Brit. J. Plast Surg. 55, (2), 129-135 (2002).
  50. Rucker, M., Kadirogullari, B., Vollmar, B., Spitzer, W. J., Menger, M. D. Improvement of nutritive perfusion after free tissue transfer by local heat shock-priming-induced preservation of capillary flowmotion. J. Surg. Res. 123, 102-108 (2005).
  51. Rucker, M., et al. New model for in vivo quantification of microvascular embolization, thrombus formation, and recanalization in composite flaps. J. Surg. Res. 108, (1), 129-137 (2002).
  52. Wang, W. Z., Baynosa, R. C., Zamboni, W. A. Update on ischemia-reperfusion injury for the plastic surgeon. Plast. Reconstr. Surg. 128, (6), 685e-692e (2011).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics