हेलसिंकी चूहा microsurgical sidewall धमनीविस्फार मॉडल

1Neurosurgery Research Group, University of Helsinki, Helsinki, Finland
Published 10/12/2014
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Medicine

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Summary

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Marbacher, S., Marjamaa, J., Abdelhameed, E., Hernesniemi, J., Niemelä, M., Frösen, J. The Helsinki Rat Microsurgical Sidewall Aneurysm Model. J. Vis. Exp. (92), e51071, doi:10.3791/51071 (2014).

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Abstract

प्रायोगिक saccular धमनीविस्फार मॉडल वे नैदानिक ​​व्यवहार में पेश कर रहे हैं इससे पहले उपन्यास शल्य चिकित्सा और ENDOVASCULAR उपचार के विकल्प और उपकरणों के परीक्षण के लिए आवश्यक हैं. इसके अलावा, प्रयोगात्मक मॉडल saccular aneurysms का टूटना करने के लिए प्रमुख जटिल धमनीविस्फार जीव विज्ञान को स्पष्ट करने की जरूरत है.

Saccular aneurysms के लिए प्रयोगात्मक मॉडल के कई अलग अलग प्रकार के विभिन्न प्रजातियों में स्थापित किया गया है. उनमें से कई, हालांकि, उनके व्यापक उपयोग को सीमित करता है, जो विशेष कौशल, महंगे उपकरण, या विशेष वातावरण की आवश्यकता होती है. एक सरल, मजबूत, और सस्ती प्रयोगात्मक मॉडल विभिन्न संस्थानों में एक मानकीकृत तरीके से इस्तेमाल किया जा सकता है कि एक मानकीकृत उपकरण के रूप में की जरूरत है.

microsurgical चूहा उदर महाधमनी sidewall धमनीविस्फार मॉडल उपन्यास ENDOVASCULAR उपचार रणनीतियों और एक मानकीकृत और सस्ती में धमनीविस्फार जीव विज्ञान के आणविक आधार दोनों अध्ययन करने की संभावना को जोड़ती हैढंग से. आकार, आकार, और ज्यामिति के माध्यम से मानकीकृत ग्राफ्ट एक दाता चूहे उतरते वक्ष महाधमनी से काटा और फिर एक syngenic प्राप्तकर्ता चूहे में प्रत्यारोपित किया जाता है. aneurysms निरंतर साथ अंत करने के पक्ष sutured या अधोमूत्र पिंडीय उदर महाधमनी को 9-0 नायलॉन टांके बाधित कर रहे हैं.

हम आवश्यक उपकरणों पर कदम दर कदम प्रक्रिया संबंधी निर्देश, जानकारी मौजूद है, और चूहे में एक उदर महाधमनी sidewall धमनीविस्फार के सफल microsurgical निर्माण के लिए महत्वपूर्ण संरचनात्मक और शल्य विवरण पर चर्चा.

Introduction

एक saccular प्रमस्तिष्क धमनी धमनीविस्फार का टूटना स्ट्रोक, स्थायी स्नायविक क्षति, या मौत के लिए अग्रणी जीवन धमकी रक्तस्राव का कारण बनता है. टूटना या तो microsurgical क्लिपिंग या ENDOVASCULAR धमनीविस्फार रोड़ा से रोका जा सकता है. धमनीविस्फार विकास और टूटना को रोकने के लिए एक चिकित्सा उपचार अभी तक स्थापित नहीं किया गया है.

Saccular aneurysms के लिए प्रयोगात्मक मॉडल धमनी aneurysms के और उपन्यास चिकित्सीय उपकरणों और रणनीतियों के परीक्षण के लिए जीव विज्ञान का अध्ययन करने की जरूरत है. इन प्रयोजनों के लिए, विभिन्न प्रजातियों में कई अलग अलग मॉडल विकसित किया है और 1 प्रकाशित किया गया है. सूअर, कुत्ते, और खरगोश में बड़ा धमनीविस्फार मॉडल अधिमानतः जटिल धमनीविस्फार वास्तुकला 1,2 में ENDOVASCULAR नवाचारों का परीक्षण करने के लिए उपयोग किया जाता है. Murine धमनीविस्फार मॉडल, दूसरी ओर, आनुवंशिक रूप से संशोधित प्रजातियों 3,4 में अनुसंधान सवालों के परीक्षण की अनुमति और सेलुलर और आणविक में धमनीविस्फार जीव विज्ञान के स्पष्टीकरण की सुविधाबड़ी प्रजाति 1 की तुलना में कहीं बेहतर स्तर. ENDOVASCULAR पार मन्या और पार श्रोणिफलक डिवाइस तैनाती बड़ा चूहों तक ही सीमित (> 400-500 ग्राम) और छोटे से 2.0 मिमी और व्यास 5,6 में 1.5 मिमी स्टंट्स जाता है, स्टंट्स भी उदर महाधमनी में प्रत्यक्ष प्रविष्टि के माध्यम से रखा जा सकता है प्रयोगात्मक aneurysms शरण खंड. चूहे microsurgical उदर महाधमनी sidewall धमनीविस्फार मॉडल का उपयोग कर पिछले काम के परीक्षण के उपन्यास embolic उपकरणों में इसकी व्यवहार्यता और धमनीविस्फार जीव विज्ञान 3,7 के आणविक आधार अध्ययन में इसके उपयोग का प्रदर्शन किया.

वर्तमान में प्रकाशित प्रयोगात्मक saccular धमनीविस्फार मॉडल से कई महंगे उपकरण, विशेष वातावरण (प्रतिदीप्तिदर्शन क्षमताओं के साथ जैसे बाँझ आपरेशन रूम), interventional रेडियोलोजी क्षमता, या महंगा प्रजातियों के उपयोग की आवश्यकता है. इन जरूरतों को इन मॉडलों के व्यापक उपयोग को सीमित, और एम जो विभिन्न प्रयोगशालाओं में विभिन्न मॉडलों का उपयोग करने के लिए नेतृत्वakes डेटा तुलना और मेटा विश्लेषण असंभव नहीं तो मुश्किल. एक सरल, मजबूत, और सस्ती प्रयोगात्मक मॉडल विभिन्न संस्थानों से तुलनीय परिणाम प्राप्त करने के क्रम में विभिन्न प्रयोगशालाओं में एक मानकीकृत तरीके से इस्तेमाल किया जा सकता है कि एक मानकीकृत उपकरण के रूप में की जरूरत है. इस प्रयोजन के लिए, हम चूहे महाधमनी sidewall saccular धमनी धमनीविस्फार मॉडल बनाया.

इस रिपोर्ट का उद्देश्य आवश्यक उपकरणों पर कदम दर कदम प्रक्रिया संबंधी निर्देश, जानकारी पेश करने के लिए, और चूहे में उदर महाधमनी sidewall aneurysms के सफल microsurgical निर्माण के लिए महत्वपूर्ण संरचनात्मक और शल्य विशेषताओं पर चर्चा करने के लिए है.

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Protocol

नोट: पुरुष Wistar चूहों (शरीर के वजन का मतलब: 356 ± 44 ग्राम, 10-14 सप्ताह पुराने) 22-24 डिग्री सेल्सियस और बारह घंटे प्रकाश / गोली आहार के लिए नि: शुल्क प्रवेश, नियमित रूप से पानी के नल के साथ अंधेरे चक्र में पशु कमरे में रखे थे और भी संस्थागत दिशा निर्देशों के अनुरूप मानवीय देखभाल प्राप्त किया. प्रयोगों की समीक्षा की और हेलसिंकी, फिनलैंड के विश्वविद्यालय में पशु कल्याण के लिए समिति द्वारा अनुमोदित किया गया.

नोट: medetomidine हाइड्रोक्लोराइड (0.5 मिलीग्राम / किग्रा) और ketamine हाइड्रोक्लोराइड की intraperitoneal इंजेक्शन (50 मिग्रा / किग्रा) के वजन से अनुकूलित चमड़े के नीचे इंजेक्शन द्वारा चूहा चतनाशून्य: निम्नलिखित प्रदर्शन में हमारे शल्य चिकित्सा पद्धति के रूप में निम्नानुसार है. एक पैर के अंगूठे चुटकी पलटा की कमी के लिए टेस्ट चूहा पूरी तरह anesthetized है कि पुष्टि करने के लिए. उदाहरण chlorhexidine के लिए, या तो शराब या पानी में, नेत्र मरहम लागू शल्य साइट क्लिप, और एक उपयुक्त निस्संक्रामक के साथ त्वचा को साफ. सुरक्षात्मक कपड़े, एक सिर को कवर और चेहरे पर डाल दिया, हाथ धो लेंमास्क, और बाँझ सर्जिकल दस्ताने. सड़न रोकनेवाला सर्जरी की स्थिति को बनाए रखने में एक शल्य चिकित्सा सहायक सहायता देना और (1 टेबल में सूचीबद्ध) के रूप में शल्य चिकित्सा विशेषताओं दस्तावेज़ करने के लिए. हानिकारक उत्तेजना (पैर की अंगुली चुटकी टेस्ट) को सांस की दर, हृदय गति, और प्रतिक्रिया का पालन करके सर्जरी के दौरान संज्ञाहरण हर 15 मिनट की गहराई मॉनिटर. Buprenorphine (0.03 मिलीग्राम / किग्रा) के चमड़े के नीचे इंजेक्शन पश्चात analgesia के लिए दिया जाता है और हर 12 घंटे यदि आवश्यक हो तो दोहराया गया था.

1 हार्डवेयर, उपभोज्य, और पोजिशनिंग

  1. , शांत छोटे पशु शल्य चिकित्सा कक्ष रखें सड़न रोकनेवाला, और 23 +/- 3 डिग्री सेल्सियस पर कमरे के तापमान को बनाए रखने. निम्नलिखित न्यूनतम उपकरणों के लिए आवश्यक है प्रयोगात्मक धमनीविस्फार सर्जरी प्रदर्शन करने के लिए:
    1. आदर्श रूप से एक सहायक गुंजाइश और डिजिटल माइक्रोस्कोप कैमरा से लैस एक तालिका के शीर्ष सर्जिकल माइक्रोस्कोप का उपयोग करें. प्रयोगशाला बेंच की रक्षा के लिए nonporous पुन: प्रयोज्य ऑपरेटिंग सतह और cleanable साधन सतह का प्रयोग करें.
    2. सर्जिकल कैंची, ऊतक संदंश, कोमल ऊतक स्प्रेडर या स्वयं को बनाए रखना retractor, और दो मच्छर शल्य क्लैंप: निम्न मानक सर्जिकल उपकरणों का उपयोग करें.
    3. घुमावदार microneedle धारक, घुमावदार एक और दो सीधे microforceps, और एक सीधे या घुमावदार microscissor: एक शामिल है कि बुनियादी microsurgical उपकरण सेट का प्रयोग करें.
    4. सर्जरी के दौरान गैर चिपचिपा और स्वच्छ साधन रखने के लिए बाँझ खारा से भरा एक गुर्दा डिश में microsurgical यंत्र रखें. गुर्दे पकवान रबर चटाई या सूक्ष्म उपकरणों के सुझावों को नुकसान को रोकने के लिए एक सर्जिकल दस्ताने के साथ गद्देदार है. सभी आपूर्ति बाँझ हैं और प्रक्रिया प्रयोगशाला जानवरों पर अस्तित्व सर्जरी के लिए मौजूदा सिफारिशों के अनुसार सड़न रोकनेवाला तकनीक के साथ किया जाता है कि यह सुनिश्चित करें
    5. इसके अलावा, एक नाड़ी क्लिप applicator और तीन atraumatic अस्थायी संवहनी clamps का उपयोग करें. यह प्रयोग किया clamps चूहा महाधमनी की बहुत पतली दीवार को चोट को रोकने के लिए एक कम समापन शक्ति है कि महत्वपूर्ण है. इसके अलावा आधा मिलीमीटर पैमाने सलाखों, एक छोटा सा रंग रबर पैड, और एक छोटी कुंद सुई के साथ एक शासक तैयार करते हैं.
    6. एक लापरवाह स्थिति में चूहों प्लेस दोनों सामने स्थिर और त्वचा के लिए खिंचाव या संपीड़न लागू किए बिना शल्य चिकित्सा टेप के साथ पंजे हिंद, और वापस की लकड़ी क्षेत्र के अंतर्गत रखकर एक मोटी मार्कर या दाग़ना कलम के साथ उनके वापस मोड़. यह microsurgical सम्मिलन की सुविधा जो अधोमूत्र पिंडीय महाधमनी को retroperitoneal जोखिम और उपयोग में सुधार के क्रम में जितना संभव काठ का रीढ़ अग्रकुब्जता प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है. इस स्थिति उदर महाधमनी धमनीविस्फार निर्माण के लिए सिफारिश की है, लेकिन वक्ष भ्रष्टाचार एकत्रित करने के लिए आवश्यक नहीं है.

2 भ्रष्टाचार कटाई

  1. यूnder सामान्य संज्ञाहरण, वक्ष गुहा खोलने (भ्रष्टाचार ischemia के समय शुरू). चूहे निम्न चरणों के साथ आगे बढ़ने से पहले अनुत्तरदायी है कि पुष्टि के लिए एक हानिकारक पैर की अंगुली चुटकी लागू करें. Midventral पेट की दीवार के माध्यम से कट, बस जिगर ऊपर डायाफ्राम की पहचान, और रिब पिंजरे के लिए उपयोग की अनुमति के लिए डायाफ्राम के नीचे स्थित संयोजी ऊतक काटा. पसलियों के माध्यम से कट बड़ी कैंची, नीचे कुंद पक्ष के साथ सिर्फ एक सेंटीमीटर छोड़ दिया और रिब पिंजरे midline के सही और वक्ष गुहा खुला. फेफड़ों दिल के दाईं ओर करने के लिए जुटाए हैं. Ketamine hydrochloride.Pulmonary ट्रंक, बाएं अवजत्रुकी नस की intracardiac इंजेक्शन, छोड़ा कपाल रग कावा साथ overdosing द्वारा चूहों बलिदान, और शरीर का अवयव नस समीपस्थ वक्ष महाधमनी की फसल के साथ हस्तक्षेप.
  2. दुम प्रमुख नसों को सूक्ष्म कैंची और microforceps का उपयोग उतरते वक्ष महाधमनी के विच्छेदन शुरू करने के लिए एक अच्छा प्रवेश बिंदु है.
  3. वक्ष महाधमनी बी ट्रेसऊपर की ओर मच्छर शल्य क्लैंप के साथ कोमल कुंद त्याग और विच्छेदन से महाधमनी चाप को छाती के पृष्ठीय दीवार से ack.
  4. क्लैंप और फिर कैंची से नसों में कटौती. नसों पर clamps बनाए रखें और अंतर्निहित महाधमनी चाप का पर्दाफाश करने के लिए एक प्रत्याकर्षक के रूप में इस्तेमाल करते हैं.
  5. बस महाधमनी छोड़ने पहले पसलियों के बीच धमनी के ऊपर एक गैर absorbable 6-0 रेशम संयुक्ताक्षर रखें.
  6. बस छोड़ दिया अवजत्रुकी धमनी नीचे और फिर संयुक्ताक्षर नीचे उतरते महाधमनी काटें. ट्रिमिंग करने वाली एक सीधा मानकीकृत धमनीविस्फार ज्यामिति पाने के लिए किया जा सकता है, या यदि आवश्यक हो तो, धमनीविस्फार और महाधमनी की धुरी के बीच एक विशेष कोण पाने के लिए. इसकी चौड़ाई और लंबाई में भ्रष्टाचार उपाय.
    नोट: काटा ग्राफ्ट या तो तुरंत प्राप्तकर्ता चूहों में प्रत्यारोपित या आगे भ्रष्टाचार दीवार की decellularization प्राप्त करने के लिए कार्रवाई की जा सकती है. Decellularized ग्राफ्ट एक बाद की तारीख पर फिर से आरोपण (चित्रा 1) जब तक -4 डिग्री सेल्सियस पर भंडारित किया जा सकता है. गुधमनीविस्फार दीवार की ई decellularization 11 विस्तार करने के लिए धमनीविस्फार संभावना अधिक होती है दिखाया गया है.

3 भ्रष्टाचार Decellularization

  1. रुक दाता ग्राफ्ट फॉस्फेट में डिग्री सेल्सियस पर -4 खारा buffered.
  2. अगले दिन, ग्राफ्ट गल कमरे के तापमान पर शुद्ध और विआयनीकृत पानी से कुल्ला, और 0.1% सोडियम dodecyl सल्फेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 घंटे के लिए सेते हैं.
  3. अंत में, कोमल आंदोलन के साथ सोडियम dodecyl सल्फेट का इलाज ग्राफ्ट तीन बार धो फॉस्फेट बफर खारा में फ्रिज में है, और पर रखने -4 डिग्री सेल्सियस उपयोग करें जब तक.

4 धमनीविस्फार निर्माण

  1. उदर महाधमनी का विच्छेदन
    1. पशु anaesthetized गया है, शल्य साइट से फर क्लिप और एक उपयुक्त निस्संक्रामक के साथ त्वचा को साफ. पूर्व त्वचा चीरा के लिए एक पैर की अंगुली चुटकी प्रतिक्रिया की कमी के लिए टेस्ट. जननांगों को चीरा 1cm समीपस्थ प्रारंभ मैंn midventral स्थिति (आपरेशन शुरू समय). ध्यान से अंतर्निहित मांसपेशियों से त्वचा अलग. उरोस्थि के नीचे दो सेंटीमीटर के एक छोर विच्छेदन.
    2. ध्यान से लेकिन दृढ़ता से अंतर्निहित अंगों को नुकसान से बचने के लिए अंतर्निहित पेट की मांसपेशियों को खींच. असिरूप प्रक्रिया को ऊपर की तरफ linea अल्बा साथ अनुदैर्ध्य कटौती बढ़ाएँ और मूत्राशय के स्तर पर दुम दिशा में खत्म होता है.
    3. धीरे retroperitoneal अंतरिक्ष के लिए उपयोग की सुविधा के क्रम में इसे खाली करने के लिए मूत्राशय के लिए दबाव लागू होते हैं.
    4. छोटी आंतों और सही या बाईं ओर प्रमुख अंधान्त्र ले जाएँ. उदर गुहा के बाईं तल पर बड़ी आंत अर्थात् उतरते बृहदान्त्र पहचानें.
    5. पृष्ठीय शरीर दीवार के व्यापक फैलाव अनुमति देने के लिए छोटी आंत और कपाल दिशा में उतरते पेट के बीच में बंध काटें. अलग आंत पकड़ करने के लिए एक आत्म बनाए रखने प्रत्याकर्षक रखें.
    6. अंत करने के पक्ष धमनीविस्फार सम्मिलन मैं एक आदर्श स्थानगुर्दे और iliolumbar नसों के बीच के स्तर पर पाया है. उदर महाधमनी वसा ऊतक में एम्बेडेड retroperitoneal निहित है. विच्छेदन के दौरान बनती लगभग पारदर्शी मूत्रवाहिनी और वृषण जहाजों पर विशेष ध्यान दें.
    7. आंतों के आगे तर्क की जरूरत है, बड़ा धुंध स्वैप का उपयोग करें. चूहे की पीठ के निचले हिस्से के तहत एक दाग़ना कलम या इसी तरह की वस्तु रखकर स्थिति के दौरान प्रेरित काठ का रीढ़ अग्रकुब्जता, काफी मल त्याग की आवश्यकता कम कर देता.
    8. पृष्ठीय शरीर दीवार के उदर सतह एक पतली पार्श्विका पेरिटोनियम से आच्छादित है. इस खोला है एक बार, बस नीचे महाधमनी कल्पना. आसन्न बड़े नसों से उदर महाधमनी से सावधान तेज और कुंद विच्छेदन के दौरान पोत दीवार को नुकसान से बचने के लिए केवल बाह्यकंचुक समझ.
    9. कभी कभी, छोटे काठ धमनियों उदर महाधमनी के पृष्ठीय सतह से कमानी पोत के रूप में पैदा होती है और तैयारी के साथ हस्तक्षेप. पोत के ligation और कटौती nee हैधमनीविस्फार suturing दौरान पतित बह से बचने के लिए ded. घुमावदार सूक्ष्म संदंश का प्रयोग गहराई में संयुक्ताक्षर प्लेसमेंट की सुविधा कर सकते हैं.
  2. अंत करने के पक्ष सम्मिलन
    1. उदर महाधमनी के नीचे एक रंगीन रबर पैड रखो और एक छोटे धुंध झाड़ू के साथ यह असबाब. नियोजित सम्मिलन साइट के स्तर पर ढीली संयोजी ऊतक और बाह्यकंचुक निकालें.
    2. सबसे पहले, तो समीपस्थ सम्मिलन के लिए उदर महाधमनी बाहर का दबाना (महाधमनी clamping के समय शुरू). इस पोत की एक फर्म भरने सुनिश्चित करता है और बाद में arteriotomy की सुविधा.
    3. सीधे या घुमावदार सूक्ष्म कैंची का उपयोग arteriotomy प्रदर्शन करना. एक सूक्ष्म संदंश एक अंडाकार आकृति को काटने के लिए पोत दीवार का एक बहुत छोटा टुकड़ा ऊपर रखती है.
    4. एक कुंद इत्तला दे दी सुई का उपयोग दोनों दिशाओं में नमक के साथ अच्छी तरह से धमनी फ्लश.
    5. (Arteriotomy के समीपस्थ और बाहर अंत में यह अंत करने के पक्ष सम्मिलन के पहले दो टांके रखें सम्मिलन समय शुरू). जब भी संभव सूक्ष्म संदंश के साथ पोत दीवार के लोभी से बचें. प्रत्येक सीवन पोत दीवार के सभी परतों के माध्यम से रखा गया है कि सुनिश्चित करें.
    6. या तो निरंतर या बाधित टांके रूप suturing प्रदर्शन करना. बाधित suturing चुना जाता है तो पहले पीछे की ओर नौ o`clock सिवनी जगह है. इसके बाद टांके बहुत पहले सिवनी के निकट शुरू करने के अलावा दूरी जा सकता है. ध्यान से बाह्यकंचुक समझ. Intima के किसी भी फैलाएंगे / लोभी से बचें.
    7. पीछे की दीवार समाप्त हो गया है, गलत टांके के लिए सम्मिलन के endoluminal भाग की जाँच करें. सामने की ओर उसी क्रम में एक ही प्रक्रियाओं का प्रदर्शन. सिवनी प्रति तीन समुद्री मील की कुल के पहले भी तंग फर्म लेकिन नहीं दी जाए.
  3. Hemostasis और क्लोजर
    1. पक्ष सम्मिलन के लिए अंत (अंत सम्मिलन समय) पूरा करने के बाद, नमक के साथ साइट कुल्ला और (backflow के लिए अनुमति देने के लिए पहली अंत महाधमनी समय और अंत भ्रष्टाचार ischemia तिवारी clamping बाहर का दबाना हटानेमुझे).
    2. स्पष्ट खून बह रहा एक अतिरिक्त सिलाई की जरूरत हो सकती backflow से उत्पन्न होती है (hemostasis के समय शुरू). नाबालिग बह के मामले में, एक धुंध झाड़ू का एक छोटा सा टुकड़ा का उपयोग रक्तस्राव साइट पर कोमल दबाव के साथ hemostasis हासिल.
    3. , समीपस्थ संवहनी दबाना निकालें एक बार फिर सम्मिलन साइट कुल्ला, और धमनीविस्फार गुंबद पर संयुक्ताक्षर के शेष सिरों काट दिया.
    4. शिखर धमनी नाड़ी लहर के दौरान धमनीविस्फार की मात्रा में वृद्धि के अवलोकन से धमनीविस्फार की प्रत्यक्षता की पुष्टि करें. प्रत्यक्ष "दुहना परीक्षण" के माध्यम से बाहर का पेट धमनी प्रत्यक्षता का आकलन करें.
    5. प्लास्टिक शीट और नीचे छोटे धुंध झाड़ू निकालें. बनाया धमनीविस्फार के भीतर pulsating रक्त चक्कर स्पष्ट रूप से दिख रहा है.
    6. छोटे बह अभी भी मौजूद है (hemostasis के अंत समय) अतिरिक्त hemostasis के लिए वसा ऊतकों या Spongostan के छोटे टुकड़ों के साथ सम्मिलन के आसपास सीवन लाइनों को कवर.
    7. नरम ऊतक स्प्रेडर और धुंध swabs निकालें.वापस उनके सही स्थिति में छोटी आंतों, अंधान्त्र, और वसा द्रव्यमान रखें.
    8. 5-0, 4-0, या 3-0 3-0 resorbable polyfilament सिवनी (अंत संचालन समय) के साथ निरंतर सिवनी तकनीक का उपयोग त्वचा घाव बंद द्वारा पीछा resorbable या गैर absorbable sutures का उपयोग midline पेट की मांसपेशियों को बंद करें. नोट: हमारे अनुभव चूहों गैर absorbable monofilament टांके से बेहतर resorbable त्वचा टांके सहन में.

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Representative Results

एक पायलट श्रृंखला 14 चूहों शामिल थे. इसके बाद 84 जानवरों की कुल 2012 अतिरिक्त 29 जानवरों धमनी saccular ग्राफ्ट के लिए दानदाताओं के रूप में कार्य मार्च और सितंबर के बीच कई अनुसंधान परियोजनाओं के लिए प्रस्तुत प्रोटोकॉल के अनुसार संचालित कर रहे थे. शेष प्रयोगों काटा और एक ही लिंग, तनाव, वजन, और उम्र के चूहों का उपयोग कर पिछले प्रयोगों से संग्रहीत पूर्व इलाज ग्राफ्ट का उपयोग कर प्रदर्शन किया गया.

शरीर का वजन, समग्र संचालन समय, महाधमनी clamping समय, सम्मिलन सृजन के लिए समय, समय सम्मिलन निर्माण, भ्रष्टाचार ischemia के समय के बाद Hemostasis के लिए, और निर्माण के समय (धमनीविस्फार चौड़ाई और लंबाई) में धमनीविस्फार आयाम दर्ज की है और लिखा मामले की रिपोर्ट फार्म से निकाला गया . सभी विशेषताओं संक्षेप और 1 टेबल और चित्रा 1 में कल्पना कर रहे हैं.

कारण abdo की घनास्त्रता करने के लिए एक दूसरे ऑपरेशन कराना पड़ा कि एक पशु के अपवाद के साथसम्मिलन साइट पर मीनल महाधमनी बाहर का कोई periprocedural मृत्यु दर या रुग्णता थे. आपरेशन समय मतलब कम से कम 52 मिनट (52 ± 12 मिनट) था. Syngeneic aneurysms के प्रत्यारोपण के साथ पशुओं में (n = 21) भ्रष्टाचार ischemia के समय 29 ± 7 मिनट था मतलब. कुल मिलाकर मतलब महाधमनी clamping के समय 25 ± 7 मिनट था. आकार के कम विचलन के साथ लगातार होने का पता चला धमनीविस्फार आयाम (चौड़ाई 2.5 ± 0.2 मिमी मतलब और लंबाई 3.8 ± 0.2 मिमी मतलब है).

एकत्र आंकड़ों सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर का उपयोग विवरणात्मक विश्लेषण और दृश्य कराना पड़ा. मान मतलब ± मानक विचलन (एसडी) और 95% विश्वास अंतराल (सीआई) के रूप में व्यक्त कर रहे हैं.

चित्रा 1
चित्रा 1:. गैर decellularized या decellularized Grafts वक्ष महाधमनी से अनुपचारित देशी दाता ग्राफ्ट तुरंत प्राप्तकर्ता चूहों में फिर से प्रत्यारोपित कर रहे हैं (1). ग्राफ्ट होने के लिएdecellularized फिर से आरोपण जब तक सोडियम dodecyl सल्फेट (एसडीएस) और संग्रहीत में -4 डिग्री सेल्सियस के साथ व्यवहार कर रहे हैं (2). ऊतकीय पैनल एक अनुपचारित (बाएं) और decellularized (दाएं) भ्रष्टाचार दीवार के माध्यम से अनुदैर्ध्य अनुभाग को दर्शाया गया है. Hematoxylin-eosin धुंधला.

चित्रा 2
चित्रा 2: सर्जिकल लक्षण. रेखांकन एकल डेटा मूल्यों का वितरण (छोटे काले बिंदु), डेटा मतलब (बोल्ड लंबी पट्टी), और मानक विचलन (त्रुटि पट्टियाँ) कल्पना. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

विशेषता मीन ± एसडी ऊपरी 95% सीआई - कम
शरीर के वजन को मीन (ग्राम) 363 47 350-373
आपरेशन समय मीन (मिनट) 50 11 48-53
महाधमनी clamping के समय मीन (मिनट) 25 7 23-27
सम्मिलन समय मीन (मिनट) 18 6 16 - 19
Hemostasis के समय मीन (मिनट) 2 2 2 - 3
भ्रष्टाचार ischemia के समय मीन (मिनट) 29 7 26-32
धमनीविस्फार चौड़ाई (मिलीमीटर) मीन 2.5 0.2 2.4-2.5
धमनीविस्फार लम्बाई (मिलीमीटर) मीन 3.7 0.5 3.5-3.8

तालिका 1: सर्जिकल लक्षण. एसडी = मानक विचलन; सीआई = विश्वास अंतराल

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Discussion

Saccular प्रमस्तिष्क धमनी धमनीविस्फार की जटिल जीव विज्ञान के बारे में हमारी समझ में प्रगति पशु मॉडल 3,12,13 में रोगी के नमूने और प्रयोगात्मक कार्य पर प्रयोगशाला अध्ययन से पूरित महामारी विज्ञान और नैदानिक ​​डेटा के विश्लेषण पर निर्भर करता है.

ऐसे चूहे के रूप में छोटे जानवरों स्वाभाविक प्रयोगों और आवास की कम लागत के साथ जुड़े, और विशेष उपकरणों की जरूरत को कम कर रहे हैं. चूहों में एक sidewall धमनीविस्फार के microsurgical निर्माण के लिए कम से कम 60 मिनट की एक औसत कुल संचालन समय खरगोश और कुत्तों 2,14,15 में अधिक जटिल microsurgical शिरापरक थैली धमनी द्विभाजन धमनीविस्फार के निर्माण के लिए प्रयोग किया जाता समय की तुलना में काफी कम है. कम लागत और धमनीविस्फार सृजन की तेजी के तरीकों के फायदे प्रयोगों की बड़ी संख्या और बाद में वृद्धि हुई सांख्यिकीय शक्ति के साथ पढ़ाई के चालन सुविधा हो सकती है. इसके अलावा, मौजूदा murine मॉडल को सफलतापूर्वक researc जवाब देने के लिए लागू किया गया है ट्रांसजेनिक जानवरों 3,4 सहित अधिक परिष्कृत प्रयोगशाला कार्यप्रणाली, ज़रूरत के घंटे प्रश्न. Sidewall aneurysms के निर्माण के लिए चूहों का उपयोग करते समय बाधित जरूरत 11-0 टांके अतिरिक्त microsurgical कौशल की आवश्यकता होती है, एक की जरूरत को ध्यान में रखना. चूहों में प्रस्तुत धमनीविस्फार मॉडल का प्रदर्शन भी उच्च मृत्यु दर के साथ जुड़ा हुआ है (30%, मुख्य रूप से तरल पदार्थ संतुलन और संज्ञाहरण और माउस महाधमनी के छोटे व्यास (0.5-1 मिमी) में जटिलताएं) 3.

चूहे धमनीविस्फार मॉडल के मूल सिद्धांतों समय की एक छोटी अवधि में महारत हासिल किया जा सकता है. कृंतक microsurgery में एक प्रारंभिक पाठ्यक्रम एक ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप के नीचे विच्छेदन और सिवनी तकनीक का प्रदर्शन करने में अनुभवहीन उन शोधकर्ताओं के लिए सिफारिश की है. प्रस्तुत प्रोटोकॉल में प्रकाश डाला महत्वपूर्ण कदम आगे की प्रक्रिया सरल होगा. विशेष सावधानी आसन्न बड़े नसों से उदर महाधमनी के विच्छेदन के दौरान प्रयोग किया जाना चाहिए.

ntent "> एक मध्यम आकार के चूहे के छोटे परिधीय vasculature व्यास पार मन्या और पार श्रोणिफलक ENDOVASCULAR डिवाइस तैनाती बनाता मुश्किल 5,6. हालांकि, उपकरणों को भी अंत से पहले प्रायोगिक धमनीविस्फार में प्रत्यक्ष उदर महाधमनी प्रविष्टि या प्रत्यक्ष प्लेसमेंट के माध्यम से रखा जा सकता है करने वाली साइट गर्दन अवशेष में 7,16. बड़ा परिवर्तन सम्मिलन और धमनीविस्फार ज्यामिति धारावाहिक और गैर इनवेसिव उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड, सूक्ष्म सीटी, या उच्च संकल्प चुंबकीय अनुनाद एंजियोग्राफी 16 के साथ अनुवर्ती हो सकता है. पिछले प्रयोगों समग्र उच्च पता चला प्रयोगात्मक aneurysms के एक भी मामले में महत्वपूर्ण वृद्धि या फैलने के अपवाद के साथ पेरी या अंतर प्रक्रियात्मक एंटिकोगुलेशन और antiaggregation 3,7,16 बिना निर्माण के बाद छह सप्ताह के एक औसत अनुवर्ती. में 92.5% की प्रत्यक्षता दरों नहीं मनाया गया और उनमें से कोई भी 3 उठी.

हालांकि, काटा ग्राफ्ट decellularized रहे हैं aneurysms डीईएमघनास्त्रता, recanalization, विकास, और अंततः टूटना 11 की एक विषम पैटर्न onstrate. बाद के अध्ययन में बढ़ते aneurysms उल्लेखनीय adventitial फाइब्रोसिस और सूजन, पूरी दीवार विघटन का प्रदर्शन किया, और असंगठित intraluminal thrombus में न्युट्रोफिल संचय में वृद्धि हुई. इस रास्ते में मॉडल धमनीविस्फार विकास और टूटना अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है और संभावित रूप से बढ़ रही है और टूटना प्रवण aneurysms में embolization उपकरणों से प्रेरित जैविक प्रतिक्रियाओं का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. आदर्श embolized जा सकता है कि उपलब्ध धमनीविस्फार मॉडलों में से कोई भी एक मानव saccular प्रमस्तिष्क धमनी धमनीविस्फार का प्रतिनिधित्व करते हैं या धमनीविस्फार गठन या टूटना पीछे सटीक pathobiology पुनरुत्पादन.

यह किस हद तक भ्रष्टाचार (शिरापरक या धमनी थैली) और angioarchitecture (sidewall या विभाजन का निर्माण) के चुनाव का विकल्प नैदानिक ​​व्यवहार में परिणामों का अनुवाद प्रभावित करने के लिए बहस का विषय बनी हुई है. निश्चित रूप से विभिन्न मॉडलों अलग के लिए इष्टतम हैंउद्देश्यों, और कुछ संस्थानों में एक बहुत ही उच्च स्तर के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. प्रस्तुत मॉडल अन्य मॉडलों अप्रचलित नहीं कर देगा. एक अन्वेषक विभिन्न तकनीकी मॉडल और जानवरों सबसे अच्छा प्रयोगात्मक लक्ष्यों को एक सूट है कि, व्यावहारिक दृष्टिकोण, और प्रयोगशाला वातावरण की एक विस्तृत श्रृंखला से चुनने के लिए यह आवश्यक रहेगा.

हालांकि, कुछ प्रयोगों आदर्श डेटा की और उपकरणों या उपचार की बेहतर तुलना अनुमति देने के लिए, विभिन्न संस्थानों और प्रयोगशालाओं में एक एक ही मानकीकृत मॉडल में प्रदर्शन किया जाना चाहिए. तिथि करने के लिए वहाँ ENDOVASCULAR उपकरणों की मानकीकृत परीक्षण के लिए कोई दिशानिर्देश नैदानिक ​​आवेदन करने से पहले कर रहे हैं, और पशु मॉडल 1 underused रहते हैं. मानकीकृत मॉडल एक बार multicenter यादृच्छिक preclinical परीक्षण भी अनुसंधान के इस क्षेत्र में उभरने के महत्व मिलेगा.

Microsurgical धमनीविस्फार निर्माण भ्रष्टाचार की उत्पत्ति, मात्रा करने वाली छिद्र अनुपात, और माता पिता के जहाज के मानकीकरण की अनुमति देता हैलंबे अक्ष कोण धमनीविस्फार के लिए. प्रस्तुत तकनीक माता पिता धमनी को न्यूनतम धमनीविस्फार आयाम, स्थान में बदलाव, और संबंध के साथ मानकीकृत aneurysms उत्पन्न करने के उद्देश्य से है. मानकीकरण और अपेक्षाकृत कम लागत के इस उच्च स्तर के मॉडल तो अन्य अधिक जटिल और महंगी मॉडल में परीक्षण कर रहे हैं कि embolization सामग्री और उपकरणों का परीक्षण करने के लिए एक अच्छा उपकरण बनाते हैं.

निष्कर्ष में प्रस्तुत microsurgical sidewall चूहे धमनीविस्फार मॉडल आकार, आकार, और माता पिता के धमनी के संबंध में धमनीविस्फार के ज्यामितीय विन्यास के माध्यम से मानकीकृत कर रहे हैं कि प्रयोगात्मक aneurysms बनाने के लिए एक तेज, किफायती, और लगातार विधि है.

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Disclosures

लेखकों इस्तेमाल दवाओं, सामग्री, या उपकरण में से किसी में कोई वित्तीय या वाणिज्यिक हित है.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Medetomidine Any genericon
Ketamin Any genericon
Buprenorphine Any genericon
Phosphate buffered saline
Sodium dodecyl sulfate (0.1%)
3-0 resorbable suture Ethicon Inc., USA VCP824G
5-0 non absorbable suture Ethicon Inc., USA 8618G
6-0 non absorbable silk suture B. Braun, Germany C0761060
9-0 nylon micro suture B. Braun, Germany G1118471
Spongostan Ethicon Inc., USA MS0002
Operation microscope Leica , Germany M651
Digital microscope camera Sony, Japan SSC-DC58AP
Standard surgical instruments B. Braun, Germany Multiple See protocol 1.4
Microsurgical instruments B. Braun, Germany Multiple See protocol 1.5
Vascular clip applicator B. Braun, Germany FT495T
Temporary vascular clamps B. Braun, Germany FT250T
Graph Pad Prism statistical software  GraphPad Software, San Diego, California, USA V 6.02 for Windows

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References

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