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기니 돼지의 비 터미널 혈액 샘플링 기법

Biology

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Summary

알려진 모델 있지만, 기니 피그는 현재 실험 동물 과학 분야의 틈새 시장을 대표하는 제한된 데이터는 대부분의 절차의 실행에 사용할 수 있습니다. 여기에서 우리는 의식이나 마취 기니피그 중 생체 내 혈액 샘플링 기술의 비 터미널에 네 가지 방법을 제시한다.

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Birck, M. M., Tveden-Nyborg, P., Lindblad, M. M., Lykkesfeldt, J. Non-Terminal Blood Sampling Techniques in Guinea Pigs. J. Vis. Exp. (92), e51982, doi:10.3791/51982 (2014).

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Abstract

기니 돼지는 인간에게 여러 가지 생물학적 유사성을 가지고 실험 동물 모델 1-3을 검증하고 있습니다. 특정 방법론 대응 부족에 그러나, 기니아 피그의 사용은 현재 연구와 설명 데이터의 비교적 좁은 영역을 나타냅니다. 기니피그의 해부학 적 특징은 마우스 및 래트에 비해. 따라서 샘플링 기법을 조정함으로써 예컨대, 종 특이 차이를 수용 할 수 있도록, 다른 설치류 모델과 다소 상이 충분히 고품질의 샘플들을 획득하기 위해 필요하다. 생체 내 연구에서 모두 장기 및 단기 자주 샘플링 혈액을 반복하여 필요한만큼 기술의 선택은 물론 동물에서 응력 및 불편 함을 감소시키기 위해 고려해야 할뿐만 아니라 시료의 크기 및 접근의 요구 생존뿐만 아니라 준수하도록. 정맥혈 샘플 기니피그 등의 다수 위치에서 얻을 수있다., 복재 및 경정맥을정맥, 장점과 단점을 모두 포함하는 각 기술 4,5. 여기에, 우리는 의식이나 마취 기니 돼지 중 하나에 대 한 4 개의 서로 다른 혈액 샘플링 기법을 제시한다. 절차는 모든 비 터미널 절차는 실험 동물 (6) 혈액 수집을위한 가이드 라인을 초과하지 않는 양의 샘플 및 샘플의 수를 제공합니다. 모든 설명 방법은 철저한 테스트를 거쳤으며 우리의 연구 시설에서 연구에서 생체 내 혈액 샘플링 반복 적용되고있다.

Introduction

기니 피그 인해 비타민 C, 인간의 태반과 함께 효소와 지질 단백질 프로파일뿐만 아니라 공유 유사성을 대사 비교 혈장 단백의 영양 공급을위한 요구 사항으로 인체에 생물학적 유사성의 숫자로 가치 및 검증 실험 동물 모델 태아 개발 1-3,7,8. 이 기니피그 등의 비 알코올 지방간 질환, 심혈관 질환과 비타민 C 결핍증의 추정 효과뿐만 아니라, 예를 들면의 효과로 다이어트 관련 질병의 효과 연구를위한 매력적이고 적합한 모델을 만든다. 산모식이 개입을 개발 자손.

반복 채혈은 종종 생체 내 연구에서 모두 장기 및 단기 필요합니다. 인해 종 특이 해부학 차이 샘플링 기술의 변조는 다른 설치류 모델에 비해 기니피그의 혈액 시료를 얻기 위해 필요 3,9 마취가 필요하지 않습니다. 이 기술은 혈액 (100 ~ 400 μL), 예를 들면 소량의 샘플을 반복 할 수 있습니다., 혈장 생화학 적 마커를 결정합니다. 더 작은 샘플 크기 (50 내지 100 μL)에 충분한 경우,이 아주 쉽게 귀 정맥을 천공하여 얻을 수있다. 이 기술은 또한 의식적 동물에서 수행하고 10,11 혈당을 측정 할 때, 예를 들면 유용 할 수있다. 경정맥에서 샘플링은 혈액의 많은 양 (1 ~ 2 ㎖)의 수집을 위해 수 있지만 마취가 필요합니다.

여기에, 우리는 의식이나 마취 기니 돼지 중 하나에 대 한 4 개의 서로 다른 혈액 샘플링 기법을 제시한다. PROCedures 않은 모든 터미널 절차는 실험 동물 (6) 혈액 수집을위한 가이드 라인을 초과하지 않는 양의 샘플 및 샘플의 수를 제공합니다. 그것은 스트레스를 최소로 유지해야한다는 동물 복지뿐만 아니라 좋은 과학의 이해 관계에 있습니다. 따라서, 단지 잘 훈련 된 유능한 개인은 동물의 절차를 수행해야합니다.

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Protocol

표시된 절차는 식품, 농업 및 수산부에서 덴마크의 동물 실험 검사관에 의해 승인 프로토콜에 따라 수행 하였다.

측면 복재 또는 눈꺼풀 정맥에서 1 혈액 샘플링

  1. 마취없이이 절차와 하나의 조사, 기니피그를 처리 하나, 그리고 하나의 샘플을 수집의 도움을 수행합니다.
  2. 혈관이 표시 될 때까지 전기 면도기와 뒷다리의 눈꺼풀 영역을 면도. 영역 천자 사이트 방해 모피 않도록 충분히 크다 확인.
  3. 미지근한 물을 욕조에 뒷다리를 놓고 조심스럽게 혈관이 더 팽창하고 분명하게 다리를 문질러.
  4. 깨끗한 수건으로 다리를 닦은 거즈 또는 70 % 알코올로 적신 면봉으로 구멍 사이트를 소독.
  5. 기니피그을 억제하고 즉시 무릎 관절 t 위에 부드럽게 가압하면서 하방으로 연장 뒷다리오 정체를 제공합니다.
  6. 21 G 바늘이나 란셋을 사용하여 정맥에 구멍. 혈액 등을 수집합니다., 수집 또는 모세관 튜브를 사용하여. 조심스럽게 혈액 흐름을 돕기 위해 다리를 조작.
  7. 샘플이 획득 된 후, 정체를 놓습니다. 출혈이 멈출 때까지 천자 사이트에 부드러운 압력을 거즈 나 탈지면의 조각을 적용합니다.
  8. 지혈을 보장하기 위해 5 ~ 10 분 동안 케이지와 모니터에 동물을 반환합니다.

귀 정맥에서 2 혈액 샘플링

  1. 한 동료의 도움으로 단독으로 또는 바람직 마취없이이 절차를 수행합니다.
  2. 거즈 또는 70 % 알코올에 적신 면봉을 사용하여 귀에의 등 표면을 소독.
  3. 정체를 제공하는 귀베이스에 가벼운 압력을 적용합니다.
  4. 21 G 바늘이나 란셋을 사용하여 정맥에 구멍을하고, 혈액을 수집.
  5. , 정체를 해제 샘플을 획득하고 나면, GE와 거즈 나 탈지면의 조각을 적용출혈까지 천자 사이트에 ntle 압력이 중지되었습니다.
  6. 지혈을 보장하기 위해 5 ~ 10 분 동안 케이지와 모니터에 동물을 반환합니다.

경정맥에서 3 혈액 샘플링

  1. 하나의 추가 조사의 도움을 사용하여이 절차를 수행; 하나 기니피그 처리 한 샘플을 수집.
  2. 이 절차의 전체 기간 동안 적합한 마취제로 기니 피그를 마취시키다. tiletamine의 혼합물 (0.93 ㎎ / ㎏), zolazepam (0.93 ㎎ / ㎏), 자일 라진 (1.49 ㎎ / ㎏) 및 butorphanol (0.06 ㎎ / ㎏)을 사용할 수 있습니다.
  3. 그 뒷면에있는 마취 기니 피그를 놓고 조심스럽게 꼬리 쪽 앞다리를 철회.
  4. 면도하고 소독 (예., 70 % 알코올로) 목의 복부 부분.
  5. 코트 응고 위험을 감소시키기 위해 헤파린 또는 EDTA 샘플링 이전에 하나와 주사기.
  6. 바늘 하나 ML의 주사기 AP 통신에 장착 (23 G는 나) 쇄골을 만져와 25 G를 삽입에 근접하여 1cm는 어깨 관절의 수준 정중선 측방. 약간의 부정적인 압력을가하면서 약간 위쪽과 중간 각도에서 주사기를 유지합니다. 경정맥이 매우 피상적​​ 위치해로 기본 구조물을 훼손하지 마십시오. 정맥의 증가 정체를 제공하기 위해 약간 뒤로 기니 돼지의 목을 기울입니다.
  7. 혈액 샘플이 얻어진다 앞다리를 해제하고, 바늘이 후퇴 전에 정체를 경감. 천자 사이트에 부드러운 압력을 적용 거즈 나 탈지면의 건조 조각을 사용합니다.
  8. 복구 케이지에 동물을 반환하고 마취에서 지혈 및 복구를 보장하기 위해 모니터링 할 수 있습니다.

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Representative Results

의식이나 마취 기니피그 하나로 비 종단 생체 채혈 기법 개의 상이한 접근법이 제시되었다.도 1 기니피그 가능한 천자 사이트에서 횡 복재 및 족부 혈관의 과정을 도시한다. 기니 돼지 귀의 등쪽 표면에 보이는 귀 정맥은 단지 매우 소량이 필요할 때 이러한 정맥 혈액 샘플링을 위해 사용될 수있는도 2에 도시되어있다. 경정맥 혈액 샘플링을위한 기니피그의 위치는 그림 3에서 쇼이다. 경정맥의 과정은 권장 천자 사이트에서 최상위를 가리키는 화살표와 화살표로 설명된다.

그림 1
그림 1은 기니피그의 측면 복재 및 눈꺼풀 정맥. 이미지가 코스를 보여줍니다혈액 측면 복재 (위쪽 화살표)에서 샘플링 또는 기니 돼지의 눈꺼풀 정맥 (아래 화살표)에 대한 천자 사이트입니다.

그림이
그림 2 귀 정맥.이 이미지는 기니 돼지 귀와의 등 표면에 보이는 귀 정맥 (화살표)를 보여줍니다. 단지 매우 소량이 필요할 때 이러한 정맥 혈액 샘플링을 위해 사용될 수있다.

그림 3
경정맥 혈액 샘플링을위한 기니피그도 3의 위치.이 기니피그의 위치 및 경정맥 혈액 샘플링을위한 천공 위치를 나타낸다. 화살표는 권장 천자 사이트 향해 맨 가리키는 화살표와 경정맥의 과정을 나타냅니다.

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Discussion

마우스 및 래트에 비해, 기니피그 자연에 의해 공포되고 침착 접근 및 스트레스를 줄이기 위해 올바르게 처리되어야한다. 보기의 동물 복지의 관점에서,주의 행동을 자연스럽게 우선 순위; 그러나,이도. 수집 된 데이터, 예를 들면에 불안 - 관련 효과의 위험을 줄일 스테로이드 증가한 혈중 농도, 12 글루코스 것이다. 마찬가지로, 일일 처리는 정상적인 절차에 동물을 습관화하고 더욱 스트레스를 감소시키는 역할을 할 수있다. 특히 혈액 샘플링 기술 실용적 전문성 제 숙련 작업자를 관찰하고 능력이 달성 될 때까지 이후의 감독하에 기술을 수행함으로써 획득되어야한다. 선택한 기술은 이상적으로 모두 최소한으로 스트레스와 불편 함을 감소해야하지만, 또한 표본의 크기 및 액세스의 요구 사항에 생존뿐만​​ 아니라 준수를 보장 할 수 있습니다. 모든 제시 혈액 샘플링 방법에 대해서는 무균 기술해야한다감염의 위험을 최소화하고 오염되지 않은 샘플의 수집을 보장하기 위해 사용된다.

채혈에 도시 된 접근 방법은 동물의 생존은 그 샘플 량을 제공하고 주파수가 지침에 따라 달성된다 모두 단기 및 장기 연구 6 모두에서 반복 샘플링을 위해 적용 할 수 있도록. 이 저작물을 3RS (감소)을 준수 분산 및 포함 된 동물의 수를 줄여 시간에 개별 동물의 일관된 모니터링 13,14있습니다. 여기에 제시된 기술은 실험을 시작하기 전에 고려되어야 얻을 수있는 샘플 량 (1-2 mL로 몇 μL)의 다양한 범위를 가지고있다. 비 - 마취 기니피그에 경정맥으로부터 혈액을 수집하기위한 절차 12을 설명되었다하더라도, 우리는 강하게 최대한 스트레스와 불편을 줄이기 위해 마취의 사용을 추천한다. 이렇게되면 마취의 선택은주의 해한다Y는 기니 돼지가 마취시키다과 마취의 상당한 변화 효과뿐만 아니라 유도 호흡 우울증 15, 16으로 높은 감도를 표시 할 어렵기로 악명이 있음을 지적, 해결. 기니 돼지의 경정맥이 보이지도 만져 샘플링 어려움을 증가시킬 수있다 정체 / 정맥 팽창의 삭감도이기 때문에, 따라서 일반적으로 마취 혼합물의 폐쇄성 죄기 에이전트를 방지하는 것이 좋습니다. . 더욱이, 원하는 데이터 수집 등을 방해 할 수있는 특정 anaesthetizing 제의 알려진 효과, α이 다음의 심혈관 효과 및 / 또는 증가 된 혈당 수준 - 설치류 작용제 조치 16,17을 평가해야한다. 또한 돼지 쥐 그러나 삽관 같이, 옵션이 될 수있다 등의 isoflurane로 흡입 마취의 사용은 매우 어려운 작업 관리 이것이 complic 수 있으므로 헤드 / 목 위치와 흡입 - 마스크에 의해 간섭을 방지하기 위해주의해야하다불필요한 절차를 먹었다. 일반화 된 마취 예., 흡입은 더 큰 샘플 볼륨을 제공 할 수 있습니다 심장 천자가 필요합니다. 그러나, 심장 천자는 단말기 절차 반복 샘플링 따라서 적용되지 더 설명되지 않을 것이다.

이러한 출혈, 멍, 혈전증, 감염 겁 잠재적 인 부작용은 정맥 천자 다음 발생할 수 있습니다. 우리의 경험에 의하면, 기니 피그는 현재 원고에 설명 된대로 절차를 완료했음을에서 제공하는 다른 설치류 모델에 비해 같은 바람직하지 않은 합병증의 위험이 증가가 발생하지 않습니다. 경정맥이 외면에서 시각화 될 수 없기 때문에, 그 바늘을 인출하기 전에 정체를 해소하고 근교 정맥 출혈과 멍의 위험을 최소화하기 위해 충분한 지혈을 제공하기 위해 매우 중요하다. 부작용의 경우, 치료는 항상 책임 수의학에서 모색되어야narian. 좋은 동물 복지 과학의 이유로 심각한 고려 사항 샘플 볼륨 및 주파수와 샘플링 기술의 선택의 결합 효과에 부여해야합니다. 모든 기재된 혈액 샘플링 기술은 철저하게 테스트하고 연구 시설 내 연구 생체 채혈 반복 적용되고있다.

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Disclosures

저자가 공개하는 게 없다. 모든 절차는 유럽 협약 ETS (123)의 이사회에 따른다 덴마크의 동물 실험 법에 의해 승인되었습니다.

Acknowledgments

우리는 애니 B. 크리스텐센, 엘리자베스 V. 안데르센, 벨린다 B. Bringtoft 및 실험 의학, 프레데릭 스 버그 캠퍼스, 보건 의료 학부, 덴마크 코펜하겐 대학의학과에서 동물 관리인의 숙련 된 지원을 인정합니다. 야곱 Lønholdt는 절차를 촬영에서 자신의 뛰어난 기술 지원에 대해 감사한다. 이 연구는 생체 내 약리학과 코펜하겐의 대학에 대한 LIFEPHARM 센터에 의해 부분적으로 지원되었다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Electric shaver Wella (Contura), Denmark 273207 Alternative product may be used. Multiple suppliers
Syringes  B.Braun-Omnifix-F, Germany 9161406V Alternative product may be used. Multiple suppliers
Needles BD Microlance, Spain 301156 Alternative product may be used. Multiple suppliers
Microvette collection tube  Sarstedt, D-51588Nümbrecht, Germany 201,288,100 Alternative product may be used. Multiple suppliers
Accu-Check analyzer Roche A/S Diagnostics, Denmark Alternative product may be used. Multiple suppliers
Heparin 5000 IE/ml LEO Pharma, Denmark Alternative product may be used. Multiple suppliers
Anesthesia Zoletil 50, Chemvet, Denmark Alternative product may be used. Multiple suppliers
Anesthesia Narcoxyl vet 20 mg/ml, Intervet, Denmark Alternative product may be used. Multiple suppliers
Anesthesia Torbugesic vet 10 mg/ml, Scanvet, Denmark Alternative product may be used. Multiple suppliers
Neutral eye ointment Alternative product may be used. Multiple suppliers
Gauze or a cotton swab  Alternative product may be used. Multiple suppliers
Disinfectant (70% alcohol) Alternative product may be used. Multiple suppliers

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