Et alsidigt murin model af subkortikale White Matter Stroke for Studiet af axonal degeneration og White Matter Neurobiologi

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Nunez, S., Doroudchi, M. M., Gleichman, A. J., Ng, K. L., Llorente, I. L., Sozmen, E. G., Carmichael, S. T., Hinman, J. D. A Versatile Murine Model of Subcortical White Matter Stroke for the Study of Axonal Degeneration and White Matter Neurobiology. J. Vis. Exp. (109), e53404, doi:10.3791/53404 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Slagtilfælde rammer hvid substans udgør op til 25% af kliniske slagtilfælde præsentationer, sker lydløst ved hastigheder, der kan være 5-10 gange større, og bidrager væsentligt til udviklingen af ​​vaskulær demens. Kun få modeller af fokal hvide substans slagtilfælde eksisterer, og denne mangel på egnede modeller har hæmmet forståelse af de neurobiologic mekanismer involveret i skade respons og reparation efter denne form for slagtilfælde. Den væsentligste begrænsning af andre subkortikale slagtilfælde modeller er, at de ikke fokalt begrænse infarktet og den hvide substans eller er primært blevet valideret i ikke-murine arter. Dette begrænser muligheden for at anvende den brede vifte af murine forsknings- værktøjer til at studere neurobiologi af hvide substans slagtilfælde. Her præsenterer vi en metode til pålidelig produktion af et samlingspunkt slagtilfælde i murine hvide substans ved hjælp af en lokal injektion af en irreversibel eNOS inhibitor. Vi præsenterer også flere variationer af den generelle protokol herunder to unikke stereotaktiskvariationer, retrograd neuronal tracing, samt frisk mærkning væv og dissektion, som i høj grad udvide de potentielle anvendelser af denne teknik. Disse variationer muliggøre flere tilgange til at analysere de neurobiologic virkningerne af denne fælles og dublerede form for slagtilfælde.

Protocol

Brugen af ​​dyr i denne protokol er blevet udført i overensstemmelse med procedurer, der er godkendt af University of California Los Angeles Animal Care og brug Udvalg.

Bemærk: Begynd med at identificere målet murine befolkning. I tidligere undersøgelser har kun mandlig vildtype-C57 / BL6-mus blevet anvendt, men forskellige transgene eller knockout-mus kan også anvendes. Bemærk at stereotaktiske koordinater er baseret på C57 / BL6 anatomi. Det anbefales, at hver bruger i første omgang verificere lokalisering af slaget til hvide substans.

1. White Matter Stroke Induktion - Medial Vinklet Approach

  1. Begynd ved at fremstille en forstrakt glaspipette anvendelse af 0,5 mm kapillarrør således at den distale diameter er mellem 15-25 um 11.
  2. Der fremstilles en steril 10 pi alikvot af L-Nio (N (5) - (1) -iminoethyl-L-ornithin HCI) ved 27,4 mg / ml (130 uM) i steril 0,9% normalt saltvand.
  3. Pre-fylde trukket glas pipettemed et lille volumen af ​​L-Nio (2-5 pi) ved at fæstne glaspipette til slange forbundet til en vakuumledning. Læg pipette fladt på bænken toppen og sæt trukket ende i L-Nio løsning.
    1. Påfør vakuum, indtil mindst 2 mm af 0,5 mm del af pipetten er fyldt. Sluk for vakuum og trække pipetten. Placer den til side, indtil trin 1.12.
  4. Placer musen i en induktion kammer og inducere anæstesi af musen med standard 32% isofluran strømmet gennem en fordamper (5 l / min indåndes med 5 l / min oxygen og 0,5 l / min N2) i 1 min eller indtil dybt bedøvet. Overfør musen til en stereotaktisk apparat udstyret med en stereotaktisk mikroskop. Give vedligeholdelse af anæstesi ved anvendelse 32% isofluran strømmet gennem en fordamper (2 L / min indåndes med 5 l / min oxygen og 0,5 l / min N2) og en næsekegle. Tjek anæstesidybden med en tå knivspids.
  5. Juster injektionsarmen til 36 °.
  6. Affixa trak glaspipette holder til den distale ende af lav lydstyrke tryk indsprøjtningssystem og fastgør den til injektion arm af stereotaktisk setup.
  7. Coat den bedøvede dyr knurhår med vaseline og sted kunstige tåre salve over begge øjne. Forbered en steril kirurgisk felt ved at placere en steril afdækning over dyrets hoved med en 5-10 cm åbning over hovedet. Forbered en aspetic kirurgisk overflade ved barbering pelsen overliggende kraniet. Rens hovedbunden med skiftevis Betadine og 70% spritservietter.
  8. Foretag en 1,5 cm midtlinie hovedbund incision med sterile fine sakse at blotlægge kraniet overflade. Tør kraniet med en steril vatpind og bruge en stereotaktisk mikroskop på 1-3X forstørrelse, fjerne overliggende periosteal væv ved hjælp af en steril micro punkt værktøj.
  9. Marker Bregma som et referencepunkt ved hjælp af en fin spids markør.
  10. Bor et 2 mm ellipitical kraniotomi under anvendelse af en steril fin stip kirurgisk borekrone0; begyndende posteriort på Bregma og strækker fortil lige til venstre for midterlinjen. Fjern knoglefragmenter og overliggende blødt væv, således at den cerebrale cortex kan visualiseres.
  11. Hold kirurgiske område og kortikale overflade fugtig ved intermitterende påføring dråber sterilt saltvand.
  12. Forsynes med et trukket glas pipette til injektoren arm af stereotaktisk apparat. Juster den distale ende af pipetten med Bregma og nulstille stereotaktiske koordinater.
  13. Advance pipetten til den første anterior / posterior (A / P) og medialt / lateralt (M / L) koordinater i tabel 1.
  14. Advance pipetten til kortikale overflade og nul den dorsale / ventrale (D / V) måling.
  15. Passere langsomt pipette ind i hjernen, indtil den når den første D / V koordinat i tabel 1.
  16. Med en lav volumen tryk injektionssystem fastsat til 20 psi i 20 msek impulser, injicere 100 nl af L-Nio ind i hjernen og vent 5 min at forhindre refluksop pipetten spor.
    1. Brug en kalibreret reticle i okularet af stereotaktisk mikroskop og en forstørrelse på 3X.
    2. Følgelig fortrænge alt 0,100 mm 3 (mm længde 0,5 i en pipette diameter 0,5 mm, svarende til 100 nl) fra den løftes glaspipette for hvert sæt koordinater. Ved at bruge en netvasrk, måle og standardisere da hver oprettet varierer afhængigt af forstørrelse og skalaer anvendes.
    3. For nøjagtig måling lydstyrken under hver injektion, nærmer den vinklede pipette med mikroskopet fra siden, således at luft-væske menisk har et sagittalt visning. Menisken skal vises i samme brændplan af både den indre og ydre væg af pipetten.
  17. Trække langsomt pipette og gentage trin 1.13-1.16.3 på det andet og tredje sæt koordinater i tabel 1.
  18. Efter den sidste injektion, fjern pipette og placere nok knogle voks til at fylde kraniotomi site. ENpproximate kanterne af hovedbunden såret og binde med dermal klæbemiddel.
  19. Injicer 0,1 ml 0,5% marcain i sårkanterne under anvendelse af en steril 30 G nål for at forhindre at forhindre lokal smerte i forbindelse med hovedbunden indsnit.
  20. Retur dyret til boliger og forsyning postoperative antibiotika (0,48 mg / ml trimethoprim-sulfamethoxazol, eller 0,5 mg / ml Levofloxacin) i drikkevandet i 5 dage.

2. White Matter Stroke Induktion - Posterior Vinklet Approach

  1. Udfør trin 1,1-1,12 som i den mediale vinklet tilgang protokol, undtagen justere indsprøjtning arm af stereotaktisk setup til 45 grader orienteret anterior til posterior.
  2. Advance pipetten til den første A / P og M / L koordinater i Tabel 2.
  3. Komplet resterende trin 1.14-1.20 som i den laterale vinklet tilgang protokol.

3. Retrograd Neuronal Mærkning

  1. Forbered en steril 10pi alikvot af L-Nio på 54,8 mg / ml i 0,9% normal saltopløsning.
  2. Forbered en steril prøve af 20% Fluororuby (eller 20% biotinyleret dextran amin eller 2% Fluorogold) i 0,9% normalt saltvand.
  3. Fortynd sammen 1: 1 for endelige koncentrationer på 27,4 mg / ml L-Nio og 10% Fluororuby.
  4. Udfør slagtilfælde protokol som ovenfor i trin 1.3-1.23.
  5. Visualiser indbygget fluorescerende sporstof i vævssnit ved perfusion fiksering, cryosectioning og mikroskopi som tidligere beskrevet 8.

4. Tissue Behandling for Immunofluorescens

  1. På et passende efter slagtilfælde interval fra 3 timer til 14 dage efter slagtilfælde, aflive mus via isofluran overdosis eller lokal IACUC godkendt procedure.
  2. Åbn brysthulen hjælp vinklede saks og indsætte en 23 G sommerfugl nål i venstre ventrikel.
  3. Placer en lille snit i højre atrium ved hjælp fine saks til at tillade en udstrømning track for perfusion væske.
  4. Transkardialt perfundere med 30-40 ml kold phosphatpufret saltopløsning efterfulgt af 30-40 ml kold 4% paraformaldehyd ved en hastighed på 10 ml / min ved stuetemperatur.
  5. Halshugge musen og fjerne hjernen ved hjælp af steril saks til at åbne kraniet posteriort og derefter forsigtigt fjerne den overliggende kraniet med en spatel, placere hjernen i koldt 4% PFA i 24 timer, og derefter overføre til 30% saccharose i PBS i 48 timer .
  6. Forbered fyrre mikron flydende sektioner ved hjælp af en kryostat og udfører antistof behandling som tidligere beskrevet 6-8. I denne undersøgelse, bruge følgende antistoffer: kanin anti-neurofilament 200 (1: 500 fortynding); kanin-anti-vimentin (1: 500); gede-anti-GFAP (1: 500); kanin-anti-Iba-1 (1: 1.000).

5. Tissue Behandling for protein eller RNA analyse

  1. På et passende efter slagtilfælde interval fra 3 timer til 14 dage efter slagtilfælde, aflive via isofluran overdosis eller lokal IACUC godkendt procedure.
  2. halshugge denmus og fjern hjernen ved hjælp af steril saks til at åbne kraniet posteriort og derefter forsigtigt fjerne den overliggende kraniet med en spatel.
  3. Indsæt en steril 4 mm spatel på forsiden af ​​hjernen for at adskille lugtekolben og optiske nerver. forsigtigt løfte hjernen ud af hovedskallen og anbringes i iskold dissektion puffer (1x Hanks balancerede saltopløsning, 25 mM HEPES-KOH, pH 7,4, 35 mM glucose, 4 mM natriumbicarbonat og 0,01 mg / ml cyclohexamid).
  4. Ved hjælp af en hjerne blok og sterile nye barberblade, forberede 2-3 mm plader indeholdende slagtilfælde og sted i koldt dissektion buffer.
  5. Under et dissektionsmikroskop, identificere den hvide substans underliggende motor cortex i det injicerede hemisfære. På længere efter slagtilfælde intervaller, kan regionen visuelt identificeres ved fokal nekrose og myelin bleghed.
    Bemærk: Ved tidligere efter slagtilfælde intervaller, injektion af L-Nio blandet med 1 pi 10% kan Fast Green tillade visuel identifikation af slagtilfælde (
  6. Under vejledning af en dissektionsmikroskop og bruge en frisk skalpel, forsigtigt dissekere regionen hvide substans, der indeholder slagtilfælde, identificeret ved enten Fast Green mærkning eller væv tab. Fjern overliggende cortex og underliggende striatum som ønsket.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Ved hjælp af modellen præsenteret, kan den hvide substans underliggende forben sensomotoriske cortex pålideligt målrettes. Dette kemisk induceret slagtilfælde model frembringer fokal aksonal og myelin tab, astrocytose og mikrogliose (figur 1), som typisk ses i humane lakunære infarkter. Ved at bruge tre injektioner, er en klinisk nyttig model etableret med tidlig nedskrivning på forben motoriske opgaver 7 og en lille, men væsentlig del af hjernevæv erfaringer iskæmi at immunhistokemiske, immunfluorescerende, og biokemiske teknikker er gennemførlige og pålidelige på den kvantitative niveau. Ved tidlige tidspunkter (HR) efter slagtilfælde induktion, kan detekteres ændringer i axon molekylære organisation (figur 2). Efter 7 dage, slagtilfælde afslutter sin modning til et afgrænset område af axonal tab (figur 1a). I vores hænder, denne metode producerer et samlingspunkt hvid substans læsioner opstillet cately 800 um i vandret diameter og strækker sig ca. 1 mm langs den anteriore-posteriore akse af corpus callosum. Ved 7 dage, den gennemsnitlige samlede infarkt størrelse er omtrent 0,200 mm 3 og vil have en elliptisk form. Vi har observeret ca. 10% variation i slagtilfælde størrelse både mellem dyr og mellem sektioner, afhængig af hvor i ellipsen afsnittet forekommer. Yderligere vækst i størrelsen af ​​infarkt ses sjældent over 7 dage.

Tilsætningen af en samtidig injektion af dextran amin resulterer i signifikant neuronal mærkning i lag 5 og laget 6 neuronale cellelegemer, der har axoner rager gennem regionen for slagtilfælde (figur 3). Overliggende kortikale neuroner, der ikke beskadiges af fingeret aspekter af proceduren (passage af fin nål), undergår distal axonal skade og kan identificeres ved optagelse af et sporstof med L-Nio forberedelse. Denne fremgangsmåde var brug d at demonstrere dynamiske ændringer i Axon indledende segment efter slagtilfælde 8.

Mens den lille størrelse af vævsområde påvirkes af slagtilfælde begrænser anvendelsen af ​​andre almindelige teknikker, såsom 2,3,5-triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) -farvning, kan den hvide substans slagtilfælde region identificeres i frisk væv. Tilsætningen af en fælles farvestof, såsom Fast Green producerer et identificerbart område af væv, der kan dissekeres under et dissektionsmikroskop (figur 4). Når dissekeret dette væv kan anvendes til proteinanalyse med western blot eller immunfældning eller til RNA-isolering og analyse (figur 4C). Gennem brug af forskellige transgene mus linjer, kan en række innovative fremgangsmåder anvendes til at undersøge neurobiologi efter fokal hvid substans slagtilfælde herunder celle fate kortlægningsundersøgelser og laser capture microdissection (figur 4C).

telt "fo: holde-together.within-side =" 1 "> figur 1
Figur 1:. Focal White Matter Stroke Brug Både Medial og Posterior vinklede tilgange Immunfluorescerende mærkning af neurofilamenter (A, rød) viser graden af axonal tab syv dage efter slagtilfælde ved hjælp af den mediale tilgang. Brug af den bageste vinklede fremgangsmåde, er den hvide substans slagtilfælde læsion målrettet lige over den laterale ventrikel (B, C) ​​og viser intens mikroglial (B) og astrocytisk reaktivitet (C). To astrocyt mellemliggende endeløse markører, vimentin (rød) og glial fibrillært surt protein (GFAP, grøn), både afsløre ændringer i morfologi hvide substans (fibrøse) astrocytter efter slagtilfælde (C). Scale barer = 500 um. Klik her for at se et større version af dette tal.

Figur 2
Figur 2:. Hvid Matter Stroke Alters axonal Microdomain organisation inden 3 timer af hvide substans slagtilfælde induktion, axonal microdomain organisation på knuden, præget af beta-IV spektrin (rød) og på paranode, præget af contactin-associeret protein (caspr, grøn), er afbrudt (pile, B). Kontralateral hvide substans axoner viser regelmæssig nodal, paranodal, og juxtaparanodal organisation (A og C), mens den ipsilaterale hvide substans viser nodal og paranodal forlængelse, der er typisk for axoner med tabt axoglial kontakt (B og D). Scale bar = 5 um.

Figur 3
Figur 3: Retrograde Neuronal Labeling med White Matter Stroke Identificerer individuelle neuroner med axonal skade. Co-injektion af fluorescerende dextran amin (rød) på tidspunktet for slagtilfælde induktion muliggør identifikation af de enkelte neuroner med axoner såret af slagtilfælde. De fleste af mærkningen sker i axoner inden Lag 5 og 6 neuroner i ubearbejdet sensomotoriske cortex ligger over slagtilfælde. Billedet repræsenterer 7 dage efter slagtilfælde. Scale bar = 500 um. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 4
Figur 4:. Mikrodissektion af White Matter Stroke Læsioner til brug i Biokemisk og Transkriptionelle Analyser Co-injektion af Fast Green på tidspunktet for slagtilfælde induktion muliggør tidlig identifikation af de sårede område ved 24 timer (A, øverste panel). Immunoblotting til specifikke axonale proteiner kan udføres for at påvise reduktioner i regionen for slagtilfælde alene (A, nedre panel). På længere tidspunkter, kan regionen hvide substans slagtilfælde (venstre panel) være fokalt dissekeret uden særlig mærkning (B). Højre øvre panel viser region hvide substans efter fjernelse af dissekeret region mens den nederste højre panel viser dissekeret region hvid substans indeholdende slagtilfælde (B). PCR for oligodendrocyt-specifikke gener under anvendelse RNA isoleret fra dissekerede regioner fra den hvide substans (C). IL = ipsilaterale; CL = kontralaterale; c = kontrol; s = slagtilfælde.

Indsprøjtning Anterior / Posterior Medial / Lateral Dorsal / ventrale
0,22 0,22 -2,10
2 0,70 0,15 -2,16
3 1.21 0,15 -2,18

Tabel 1: stereotaktisk koordinater for Lateral Vinklet Approach (i mm).

Indsprøjtning Anterior / Posterior Medial / Lateral Dorsal / ventrale
-0,75 -0,96 -2,10
2 -1,00 -0,96 -2,05
3 -1,25 -0,96 -2,00

Tabel 2: stereotaktisk koordinater for Posterior Vinklet Approach (i mm).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Et antal tidligere modeller af subkortikal slagtilfælde er blevet beskrevet herunder fokale injektioner af endothelin-1 i det indre kapsel, subkortikal hvid substans og striatum hos rotter 12-14 og mus 6,15. Nyere modeller af små fokale slagtilfælde har udnyttet kolesterol microemboli injektion i halspulsåren 16 og photothrombotic okklusion af en enkelt gennemtrængende arteriole 17. Hver af disse modeller har både fordele og ulemper 5. Den foreliggende beskrevne model producerer en læsion, der har en række karakteristika, der efterligner den menneskelige lacunar infarkt herunder axonal abnormiteter og tab, myelin nedbrydning, et samlingspunkt nekrotisk kerne og en klinisk underskud, der er minimal, og viser forholdsvis hurtig genopretning afhængig af alder 7. Målretning murine hvide substans tillader en lang række genetiske manipulationer, der kan understøtte mekanistiske undersøgelser.

den kritisketrin i protokollen omfatter udnytte nøjagtige stereotaktiske koordinater. Fordi murine hvide substans er lille i størrelse og varierer fra stamme til stamme, kan der være behov revision af stereotaktiske koordinater afhængigt af alder og stammen af ​​mus anvendt. Kontrol med mængden af ​​injektion er også vigtigt, da dette er direkte korreleret til størrelsen af ​​infarktet. Større injektioner vil producere større slag, der griber ind i overliggende cortex og underliggende striatum.

Focal injektion af ET-1 under anvendelse af den fremgangsmåde, der er beskrevet her er rapporteret, men endothelin-1 viste sig at have direkte parakrine virkninger på oligodendrocyt differentiering og modning 10,18 confounding studiet af efter slagtilfælde hvid substans biologi. I modsætning hertil mål tilgang L-Nio endotelceller alene, mens producere en identisk læsion og fjerner eventuelle forstyrrende parakrine virkninger på de involverede i skader respons celler. L-Nio er ikke direkte cytotoksisk og selected dosis blev bestemt ved præliminære dosiseskaleringsundersøgelser eksperimenter (data ikke vist). Den bageste vinklet fremgangsmåde blev udviklet for mere præcist at underbyde axoner fra primær motor cortex producerer den maksimale adfærdsmæssige underskud, der kan henføres til stof hvid skade. Den mediale vinklet tilgang også skader motor cortex axoner men strækker sig mere sidelæns og involverer axoner underliggende primære sensoriske cortex.

Den slagtilfælde læsion udvider temmelig hurtigt i de første 24 timer. Med syv dage, størrelsen af ​​infarktet er maksimal, og vi har ikke observeret betydelig vækst læsion ud over denne tid. Yderligere cellulære begivenheder og axonal degeneration vil forekomme ud over dette indledende stadie, men det infarkt størrelse målt ved den nekrotiske kerne vil ikke ændre sig væsentligt i fravær af enhver intervention.

Co-injektion af neuroanatomiske sporstoffer på tidspunktet for slagtilfælde identificerer neuroner oplever iskæmisk axonal skade. Brug enten withIAL eller bageste vinklet tilgang, de neuronale cellelegemer med beskadigede axonale projektioner forbliver uskadt. Dette skaber en nyttig model til at undersøge effekten af ​​iskæmisk aksotomi på centralnervesystemet neuroner. Vi har udnyttet primært retrograde sporstoffer herunder dextran amin og Flourogold, som begge viser fremragende optagelse af slagtilfælde-beskadigede axoner. Ved at anvende den brede vifte af transgene og knock-out mus linjer, kan brugere af denne protokol undersøger specifikke rolle neuronale gener involveret i hvid substans slagtilfælde skade respons og reparation.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen

Acknowledgements

SN og MDD fået støtte fra NIH K08 NS083740 og UCLA Department of Neurology. AJG anerkender støtte fra Dr. Miriam og Sheldon G. Adelson Medical Research Foundation og Larry L. Hillblom Foundation. KLN taknemmeligt anerkender støtte fra American Heart Association 14BFSC17760005 ASA-Bugher Stroke Center. ILL, EGS og STC blev støttet af NIH R01 NS071481. JDH anerkender støtte fra NIH K08 NS083740.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
L-N5-(1-Iminoethyl)ornithine, Dihydrochloride Calbiochem 400600-20MG
Isoflurane Phoenix Pharmaceutical, Inc. NDC 57319-559-06
Capillary tubes World Precision Instruments 50-821-807
Picospritzer Parker Instrumentation Picospritzer II
Stereotactic setup Kent Scientific KSC51725
Pipette puller KOPF Model 720
Stereomicroscope SZ51 Olympus 88-124
Fine scissors Fine Scientific Tools 14084-08
Forceps Harvard Apparatus PY2 72-8547
Curved Forceps Harvard Apparatus PY2 72-8598
Blunt dissection tool Fine Scientific Tools 10066-15
Drill Dremel 8220-1/28
Drill bits Fine Scientific Tools 19007-05
Vetbond 3M 1469SB 
Marcaine HOSPIRA NDC 0409-1610-50
Trimethoprim-Sulfamethaxole STI Pharmacy NDC 54879-007-16
Fluororuby Fluorochrome Inc 30 mg
Paraformaldehyde Fisher O4042-500
Sucrose Fisher BP220-10
Cryostat Leica CM3050 S 14047033518
Glass slides Fisher 12-544-7
Fast Green  Sigma F7252-5G
Dissection microscope Nikon SMZ1500
23 G butterfly needle Fisher 14-840-35
10x Hank's Balanced Salt Solution Life Technologies 14065056
1 M HEPES-KOH, pH 7.4 Affymetrix 16924
D-Glucose Sigma G8270
Sodium bicarbonate Sigma S5761
Cyclohexamide Sigma 01810

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Go, A. S., et al. Heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 129, 28-292 (2014).
  2. Saini, M., et al. Silent stroke: not listened to rather than silent. Stroke. 43, 3102-3104 (2012).
  3. Koton, S., et al. Burden and outcome of prevalent ischemic brain disease in a national acute stroke registry. Stroke. 44, 3293-3297 (2013).
  4. Jiwa, N. S., Garrard, P., Hainsworth, A. H. Experimental models of vascular dementia and vascular cognitive impairment: a systematic review. J Neurochem. 115, 814-828 (2010).
  5. Sozmen, E. G., Hinman, J. D., Carmichael, S. T. Models that matter: white matter stroke models. Neurotherapeutics. 9, 349-358 (2012).
  6. Sozmen, E. G., Kolekar, A., Havton, L. A., Carmichael, S. T. A white matter stroke model in the mouse: axonal damage, progenitor responses and MRI correlates. J Neurosci Methods. 180, 261-272 (2009).
  7. Rosenzweig, S., Carmichael, S. T. Age-dependent exacerbation of white matter stroke outcomes: a role for oxidative damage and inflammatory mediators. Stroke. 44, 2579-2586 (2013).
  8. Hinman, J. D., Rasband, M. N., Carmichael, S. T. Remodeling of the axon initial segment after focal cortical and white matter stroke. Stroke. 44, 182-189 (2013).
  9. McCall, T. B., Feelisch, M., Palmer, R. M., Moncada, S. Identification of N-iminoethyl-L-ornithine as an irreversible inhibitor of nitric oxide synthase in phagocytic cells. Brit j pharmacol. 102, 234-238 (1991).
  10. Gadea, A., Aguirre, A., Haydar, T. F., Gallo, V. Endothelin-1 regulates oligodendrocyte development. J Neurosci. 29, 10047-10062 (2009).
  11. Dean, D. A. Preparation (pulling) of needles for gene delivery by microinjection. CSH prot. (2006).
  12. Hughes, P. M., et al. Focal lesions in the rat central nervous system induced by endothelin-1. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 62, 1276-1286 (2003).
  13. Whitehead, S. N., Hachinski, V. C., Cechetto, D. F. Interaction between a rat model of cerebral ischemia and beta-amyloid toxicity: inflammatory responses. Stroke. 36, 107-112 (2005).
  14. Frost, S. B., Barbay, S., Mumert, M. L., Stowe, A. M., Nudo, R. J. An animal model of capsular infarct: endothelin-1 injections in the rat. Behav Brain Res. 169, 206-211 (2006).
  15. Horie, N., et al. Mouse model of focal cerebral ischemia using endothelin-1. J Neurosci Methods. 173, 286-290 (2008).
  16. Wang, M., et al. Cognitive deficits and delayed neuronal loss in a mouse model of multiple microinfarcts. Neuroscience. 32, 17948-17960 (2012).
  17. Shih, A. Y., et al. The smallest stroke: occlusion of one penetrating vessel leads to infarction and a cognitive deficit. Nat Neurosci. 16, 55-63 (2013).
  18. Jung, K. J., et al. The role of endothelin receptor A during myelination of developing oligodendrocytes. J Korean Med Sci. 26, 92-99 (2011).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics