पौधों में मछली के लिए उपयुक्त एक फास्ट हवा शुष्क गिराने क्रोमोजोम तैयारी विधि

1Leibniz Institute of Plant Genetics and Crop Plant Research (IPK), 2School of Biological and Chemical Sciences, Queen Mary University of London
Biology

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Aliyeva-Schnorr, L., Ma, L., Houben, A. A Fast Air-dry Dropping Chromosome Preparation Method Suitable for FISH in Plants. J. Vis. Exp. (106), e53470, doi:10.3791/53470 (2015).

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Abstract

गुणसूत्र फैलता की तैयारी स्वस्थानी संकरण में प्रतिदीप्ति के सफल प्रदर्शन (मछली) के लिए एक शर्त है। उच्च गुणवत्ता के पौधे गुणसूत्र फैलता की तैयारी की वजह से कठोर कोशिका दीवार को चुनौती दे रहा है। संयंत्र गुणसूत्रों की तैयारी के लिए मंजूरी दे दी तरीकों में से एक एक तथाकथित बूंद तैयारी भी बूंद-प्रसार या हवा सुखाने तकनीक के रूप में जाना जाता है। यहाँ, हम mitotic गुणसूत्र के तेजी से तैयार करने के लिए एक प्रोटोकॉल एकल और उच्च प्रतिलिपि डीएनए जांच की मछली का पता लगाने के लिए उपयुक्त फैलता प्रस्तुत करते हैं। इस विधि को 50% -55% की सापेक्ष आर्द्रता के तहत प्रदर्शन हवा शुष्क ड्रॉप विधि के एक उन्नत संस्करण है। इस प्रोटोकॉल अपने आवेदन, आसान, कुशल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य बनाने धोने कदम की एक कम संख्या में शामिल हैं। इस दृष्टिकोण का स्पष्ट लाभ सफल मछली के विश्लेषण के लिए एक आदर्श शर्त के रूप में सेवारत अच्छी तरह से फैला है, क्षतिग्रस्त और कई मेटाफ़ेज़ गुणसूत्रों हैं। इस प्रोटोकॉल का उपयोग हम उच्च गुणवत्ता वाले क्रोम प्राप्तosome फैलता है और Hordeum vulgare, एच bulbosum, एच Marinum, एच murinum, एच pubiflorum और Secale cereale के लिए प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मछली का परिणाम है।

Introduction

सीटू संकरण (मछली) में प्रतिदीप्ति गुणसूत्र के स्तर पर एकल और उच्च प्रतिलिपि दृश्यों की शारीरिक मानचित्रण के लिए एक प्रभावी उपकरण है। शर्त उच्च गुणवत्ता वाले गुणसूत्र फैलता की तैयारी है। पौधे और पशु कोशिकाओं के लिए समान रूप से उपयुक्त होगा कि कोई सामान्य गुणसूत्र तैयारी प्रोटोकॉल है। संयंत्र गुणसूत्रों की तैयारी की वजह से विभिन्न प्रजाति के भीतर कठोर कोशिका दीवार और विभिन्न कोशिका द्रव्य स्थिरता के लिए विशेष रूप से चुनौतीपूर्ण है। संयंत्र गुणसूत्रों की तैयारी के लिए अनुकूल तरीकों में से एक भी बूंद-प्रसार के लिए तकनीक और हवा सुखाने तकनीक 1,2 के रूप में जाना जाता है एक तथाकथित ड्रॉप तकनीक है। इस विधि पहले इन विट्रो उगाया स्तनधारी कोशिकाओं 3 के लिए Rothfels और Siminovitch द्वारा 1958 में शुरू की गई थी। बाद में मार्टिन एट अल। 4 और काटो एट अल। 5 पौधों के लिए इस विधि अनुकूलित।

अभी हाल ही में एक विधि नाम 'SteamDrop &# 39; गैर अतिव्यापी गुणसूत्रों 6 की तैयारी के लिए पानी भाप का इस्तेमाल किया है, जो विकसित किया गया था। , उच्च आर्द्रता का सकारात्मक प्रभाव पहले 7 मनाया गया था, 'SteamDrop' उच्च गुणवत्ता वाले गुणसूत्र की तैयारी 6 के एक नियंत्रित कार्यप्रवाह बचाता है। भाप उपचार शायद गुणसूत्र प्रोटीन के कुछ संशोधनों से जुड़ा गुणसूत्रों की खींच का कारण बनता है। पूरा metaphase की पर्याप्त संख्या के बनाए रखने की बाद में मछली प्रयोगों के लिए तकनीकी विशेषज्ञता की मांग फैलता है, हालांकि मेटाफ़ेज़ फैलता है जिसके परिणामस्वरूप की गुणवत्ता में बहुत अधिक है।

यहाँ हम एकल और उच्च प्रतिलिपि जांच 5.8 की मछली का पता लगाने के लिए उपयुक्त mitotic अनाज गुणसूत्रों की तैयारी के लिए एक प्रोटोकॉल उपस्थित थे। इस विधि को काटो 50% -55% के सापेक्ष आर्द्रता के तहत प्रदर्शन 9 (चित्रा 1) द्वारा वर्णित हवा शुष्क छोड़ने विधि के एक उन्नत संस्करण है। इस प्रोटोकॉल के लिए एक कम नंबर शामिलअपने आवेदन, आसान, कुशल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य बनाने धोने कदम की। हम Hordeum vulgare, एच bulbosum, एच Marinum, एच murinum, एच pubiflorum और Secale cereale के लिए उच्च गुणवत्ता वाले गुणसूत्र फैलता है और मछली परिणाम प्राप्त इस प्रोटोकॉल का उपयोग करना।

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Protocol

1. क्रोमोजोम तैयारी

  1. बीज अंकुरण और जड़ सुझावों का निर्धारण
    1. 22-24 डिग्री सेल्सियस पर 2 दिनों के लिए अंधेरे परिस्थितियों में एक पेट्री डिश में नम फिल्टर पेपर की दो परतों पर 10-20 जौ बीज अंकुरित। एक रेजर ब्लेड का उपयोग करके बीज से 1-2 सेमी की लंबाई के साथ जोरदार जड़ों से काट डाला।
    2. कुचल बर्फ के पानी में ठंड नल के पानी से युक्त एक 500 मिलीलीटर कांच की बोतल रखकर ठंडा पानी तैयार करें। बर्फ के ठंडे पानी Aerate और मेटाफ़ेज़ कोशिकाओं की आवृत्ति में वृद्धि करने के लिए 20 घंटे के लिए जड़ सुझावों को विसर्जित कर दिया।
    3. इथेनॉल के 50 मिलीलीटर पानी से जड़ों स्थानांतरण: एसिटिक एसिड (3: 1) लगानेवाला 2 दिनों के लिए आरटी पर उन्हें ठीक करने के लिए। एक नया तैयार इथेनॉल में स्टोर जड़ों: एसिटिक एसिड (3: 1) 4 डिग्री सेल्सियस पर लगानेवाला एक साल के लिए उपयोग करें जब तक।
  2. कपड़े धोने और एंजाइम उपचार
    1. 5 मिनट में दो बार एक 50 मिलीलीटर कांच बीकर प्रयोग करने के लिए 30 मिलीलीटर ठंडा पानी के नल के साथ 10-20 जड़ों को धो लें। दूरबीन माइक्रोस्कोप का प्रयोग करें। में एक एक करके जड़ों एक स्थानांतरण30 मिलीलीटर 0.01 एम साइट्रेट बफर (+ 0.01 एम सोडियम साइट्रेट 0.01 एम साइट्रिक एसिड, पीएच 4.8) संदंश का उपयोग और दो बार 5 मिनट के लिए कांच बीकर झटकों से धो लें। पूरी तरह से तरल निकालने और कट ऑफ अवांछित गैर मेरिस्टेमेटिक ऊतक एक रेजर ब्लेड का उपयोग करने के लिए फिल्टर पेपर पर जड़ों रखें।
    2. एक घड़ी गिलास में संयंत्र के ऊतकों को नरम करने के बारे में 50 मिनट (1 टेबल) के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 मिलीलीटर एंजाइम मिश्रण में 20 जड़ सुझावों अप करने के लिए सेते हैं। एनजाइम मिश्रण 0.01 एम साइट्रेट बफर में पतला 0.7% Cellulase R10, 0.7% Cellulase, 1% pectolyase और 1% cytohelicase शामिल हैं। -20 डिग्री सेल्सियस पर एंजाइम मिश्रण स्टोर और पांच गुना तक पुन: उपयोग किया।
    3. Pipetting द्वारा एंजाइम निकालें और अवशिष्ट एंजाइम को बदलने के लिए दो बार 5 मिलीलीटर 0.01 एम साइट्रेट बफर के साथ बर्फ पर जड़ सुझावों धो लें।
  3. रूट थकावट
    1. दो बार ध्यान से एक ही घड़ी गिलास में 1 मिलीलीटर 96% इथेनॉल के साथ धो जड़ टिप्स। हौसले से तैयार लगानेवाला (: 25% इथेनॉल 75% एसिटिक एसिड) के साथ इथेनॉल बदलें। 10-15 का प्रयोग करेंजड़ टिप प्रति μl लगानेवाला।
    2. एक विदारक सुई या संदंश के साथ एक 2 मिलीलीटर ट्यूब में लगानेवाला के साथ एक साथ स्थानांतरण जड़ सुझावों और बिखर जड़ मेरिस्टेमों। एक सेल निलंबन प्राप्त करने के लिए कोशिकाओं को फिर से निलंबित करने के लिए ट्यूब में 20 बार टैप करें। दो महीने के लिए -20 डिग्री सेल्सियस से ऊपर पर सेल निलंबन स्टोर।
  4. सेल निलंबन के गिराने
    1. 50 डिग्री सेल्सियस पर एक गर्म थाली पर पानी से लथपथ कागज ऊतक के 2-3 परतों रखें। 30 मिनट के लिए फ्रिज में ठंडा पानी के नल में सूक्ष्म स्लाइड विसर्जित कर दिया। और जगह नम कागज ऊतक के शीर्ष पर स्लाइड।
    2. पिपेट 7-10 सेल निलंबन के μl और गर्म थाली पर रखा ठंडा स्लाइड पर 20 सेमी की दूरी से ड्रॉप। पिपेट 10 स्लाइड पर सेल निलंबन के रूप में एक ही जगह पर एसिटिक एसिड इथेनॉल मिश्रण के μl और अतिरिक्त 2 मिनट के लिए गर्म थाली पर स्लाइड रहते हैं। गीला ऊतक के बिना गर्म थाली पर स्लाइड प्लेस और यह 1 मिनट के लिए सूखे।
  5. गुणवत्ता नियंत्रण और storagस्लाइड्स के ई
    1. गुणसूत्र प्रसार की गुणवत्ता को नियंत्रित करने के लिए एक चरण विपरीत माइक्रोस्कोप का उपयोग कर स्लाइड की जाँच करें। -20 डिग्री सेल्सियस पर एक Coplin जार में 96% इथेनॉल में डुबो कर उसी दिन या दुकान या तो स्लाइड्स का प्रयोग करें।
  6. मछली से पहले स्लाइड की pretreatment; सभी कदम आरटी पर बाहर किया जाता है
    1. 2x एसएससी के 50 मिलीग्राम से युक्त एक Coplin जार में रखें स्लाइड 5 मिनट के लिए (20x एसएससी 3 एम NaCl और 300 मिमी trisodium साइट्रेट शामिल हैं)। 3-10 मिनट के लिए 45% एसिटिक एसिड के 50 मिलीग्राम से युक्त एक Coplin जार संदंश, स्थानांतरण स्लाइड्स का उपयोग करना।
    2. स्थानांतरण 10 मिनट के लिए 2x एसएससी के 50 मिलीग्राम से युक्त एक Coplin जार करने के लिए स्लाइड। 10 मिनट के लिए (2x एसएससी) में 4% formaldehyde के 50 मिलीग्राम से युक्त एक Coplin जार करने के लिए स्थानांतरण स्लाइड और विसर्जित स्लाइड गुणसूत्रों ठीक करने के लिए।
    3. 50 मिलीलीटर 2x एसएससी युक्त एक Coplin जार में, 4 मिनट प्रत्येक के लिए स्लाइड 3 बार rinsing द्वारा फॉर्मेल्डीहाइड निकालें। एक ऊर्ध्वाधर में 70% की श्रृंखला में 2 मिनट, 90% और 100% इथेनॉल, क्रमशः और सूखी स्लाइड्स के लिए एक Coplin जार में स्लाइड्स निर्जलीकरणस्थिति।

स्वस्थानी संकरण में 2. फ्लोरोसेंट (मछली)

  1. प्रत्येक स्लाइड के लिए, विआयनीकृत formamide के 10 μl, 4x संकरण बफर के 5 μl का उपयोग करते हुए कुल 20 μl की एक संकरण समाधान तैयार (200 μl बफर 80 μl 20x एसएससी, 8 μl 1 एम Tris एचसीएल 8.0 पीएच, शामिल हैं 1.6 μl 0.5 एम EDTA, 11.2 μl 10 माइक्रोग्राम / μl सामन शुक्राणु और 99.2 μl DNase मुक्त पानी), जांच के 3 μl और DNase मुक्त पानी के 2 μl।
  2. एक 24 x 32 मिमी कवर पर्ची के साथ स्लाइड और कवर प्रति संकरण समाधान के 20 μl जोड़ें और रबर सीमेंट के साथ कवर पर्ची गिरफ्तार। एक गर्म थाली पर 2 मिनट के लिए 80 डिग्री सेल्सियस पर एक साथ जांच के साथ स्लाइड denature।
  3. स्थानांतरण एक नम चैम्बर के लिए स्लाइड और 37 डिग्री सीओ / एन परहेज प्रकाश में स्लाइड्स सेते हैं। 2x एसएससी के साथ एक Coplin जार में स्लाइड rinsing द्वारा कवर फिसल जाता है निकालें। और 55-60 डिग्री सेल्सियस 2x एसएससी युक्त एक Coplin जार में रखें स्लाइड 20 मिनट के लिए सेते।
  4. आरटी पर 2 मिनट के लिए एक Coplin जार में एसएससी 2x करने के लिए स्लाइड रखें। क्रमश: 70%, 90% और 100% इथेनॉल की श्रृंखला में 2 मिनट के लिए एक Coplin जार में स्लाइड्स निर्जलीकरण।
  5. तीव्र प्रकाश से बचने, antifade बढ़ते मध्यम में / एमएल 4 ', 6-diamidino-2-phenylindoline 1 ग्राम (DAPI) के साथ स्लाइड और counterstain हवा शुष्क।

3. सूक्ष्म विश्लेषण और संग्रहण

  1. एक epifluorescence माइक्रोस्कोप का उपयोग कर स्लाइड का विश्लेषण करें। फिल्टर का चयन जांच लेबलिंग के लिए इस्तेमाल किया fluorochrome पर निर्भर करता है। यदि आवश्यक हो, एक साल के लिए अंधेरे की स्थिति के तहत 4 डिग्री सेल्सियस पर दुकान स्लाइड्स।

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Representative Results

Mitotic मेटाफ़ेज़ फैलता के साथ सूक्ष्म स्लाइड ऊपर वर्णित तेज हवा शुष्क छोड़ने गुणसूत्र तैयारी विधि द्वारा तैयार किए गए (आपूर्तिकर्। 1 चित्रा)। मछली विश्लेषण दोनों, दोहराव और एकल कॉपी दृश्यों का उपयोग किया जाता था। छवियाँ इसी fluorophores की उत्तेजना को सक्षम करने फिल्टर का एक सेट के साथ एक epifluorescence माइक्रोस्कोप के द्वारा प्राप्त की और एक उच्च संवेदनशीलता सीसीडी मोनोक्रोम कैमरे द्वारा कब्जा कर लिया गया। छवि अधिग्रहण के लिए हम एक छवि अधिग्रहण सॉफ्टवेयर के साथ एक कंप्यूटर का इस्तेमाल किया। 5 एस rDNA, [सीटीटी 10], और एकल कॉपी जांच का उपयोग mitotic मेटाफ़ेज़ गुणसूत्रों पर मछली प्रयोगों के परिणामों से अलग थे और Hordeum vulgare के लिए एक उच्च गुणवत्ता की (Figre 2A, बी), एच bulbosum (चित्रा -2), एच Marinum, एच murinum, एच pubiflorum और Secale cereale (चित्रा 2 डी)। इस दृष्टिकोण का स्पष्ट लाभ अच्छी तरह से फैला है, क्षतिग्रस्त और कई से मुलाकात कर रहे हैं सफल मछली के विश्लेषण के लिए एक आदर्श शर्त के रूप में सेवारत aphase गुणसूत्रों। यह दो महीने के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर सेल निलंबन स्टोर करने के लिए और गुणसूत्र मछली प्रयोग के दिन पर फैलता है तैयार करने के लिए संभव है। हम इस तरह के गुणसूत्रों पर संकरण संकेतों की गुणवत्ता हौसले से तैयार मेटाफ़ेज़ फैलता की तुलना में कम हो जाता है कि मनाया हालांकि हौसले तैयार स्लाइड भी, 96% इथेनॉल में -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहित किया जा सकता है। तरीकों एक आसान, कुशल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने के रास्ते में अनाज में उच्च गुणवत्ता वाले गुणसूत्र फैलता तैयार करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और सबसे अधिक संभावना भी अन्य प्रजातियों के पौधे में इस्तेमाल किया जा सकता है।

आकृति 1
चित्रा 1. हवा शुष्क छोड़ने संयंत्र गुणसूत्र तैयारी विधि की प्रक्रिया का वर्णन एक योजना।

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Hordeum vulgare, एच के mitotic metaphase गुणसूत्र फैलता पर चित्रा 2. मछली हवा शुष्क छोड़ने विधि द्वारा तैयार bulbosum और Secale cereale। (ए)   एच एक लाल फ्लोरोसेंट डाई के साथ लेबल एक भी कॉपी जांच (FPct_40752) के साथ vulgare। (बी)   एच एक हरी फ्लोरोसेंट डाई द्वारा लेबल 5 एस rDNA जांच के साथ vulgare। (सी)   एक हरे रंग का फ्लोरोसेंट डाई और द्वारा लेबल सीटीटी-माइक्रोसेटेलाइट साथ एच bulbosum (डी)   एक हरे रंग फ्लोरोसेंट रंजक द्वारा लेबल pSc119.2 दोहराने के साथ एस cereale। सभी गुणसूत्रों (लाल रंग में) DAPI साथ counterstained थे। मछली संकेतों पीले रंग में दिखाया गया है। स्केल बार = 10 माइक्रोन। इस figu का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करेंफिर से।

तालिका एक

विभिन्न प्रजातियों के लिए एंजाइम उपचार की तालिका 1. ऊष्मायन समय।

चित्र तीन
आपूर्तिकर्। चित्रा 1. चरण विपरीत और अंतर हस्तक्षेप विपरीत (डीआईसी) Hordeum vulgare के उदाहरण पर हवा शुष्क छोड़ने संयंत्र गुणसूत्र तैयारी विधि का mitotic metaphase गुणसूत्र फैलता की छवियों। (ए)   चरण विपरीत छवि 200X बढ़ाई लिया और (बी) 630X बढ़ाई लिया अंतर हस्तक्षेप विपरीत छवि। क्लिक करेंयहां यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए।

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Discussion

गुणसूत्र तैयारी प्रयोग घास परिवार (Poaceae) से संबंधित अनाज की युवा जड़ों का उपयोग कर बाहर किया गया है। सभी का विश्लेषण प्रजातियों द्विगुणित जीनोम सेट में 14 अपेक्षाकृत लंबे mitotic मेटाफ़ेज़ गुणसूत्रों (11-15 माइक्रोन) है और बड़े जीनोम प्रजातियों (5.1-7.9 GBP) के हैं।

अंकुरित जड़ों की लंबाई मेरिस्टेमेटिक ऊतक के एक अधिकतम प्राप्त करने के लिए अधिक से अधिक 2 सेमी नहीं था। विभाजित कोशिकाओं के तुल्यकालन mitotic metaphase की मात्रा 10 से फैलता सुधार हुआ है कि एक 20 घंटा लंबा बर्फ के पानी के उपचार के द्वारा प्राप्त किया गया था।

(आई) के सापेक्ष 50% की नमी -55% और एंजाइम उपचार की (द्वितीय) अवधि: दो कदम उच्च गुणवत्ता वाले गुणसूत्र की तैयारियों की तैयारी के लिए महत्वपूर्ण हैं। पहला बिंदु गिलास स्लाइड की निकटता में एक गर्म थाली पर गीला कागज ऊतकों रखकर हासिल की थी। सापेक्ष आर्द्रता एक आर्द्रतामापी के साथ मापा गया था। संयंत्र की तैयारी के लिए इष्टतम नमीगुणसूत्रों कीरॉफ़ एट अल द्वारा रिपोर्ट आर्द्रता के लिए इसी तरह की थी। 6। इष्टतम सापेक्ष आर्द्रता में गुणसूत्र गुणवत्ता पर सकारात्मक प्रभाव कोशिका द्रव्य और कोशिका दीवार हाइड्रोलिसिस की सूजन से होता है।

एंजाइम उपचार की अवधि प्रजातियों पर निर्भर (1 टेबल) है। एंजाइम उपचार की अवधि भी जड़ इथेनॉल / एसिटिक एसिड में निर्धारण और जड़ों के आकार की समय अवधि पर निर्भर करता है। अब जड़ों यह उचित ग्रेड के लिए जड़ों को पचाने के लिए लेता है, (4 डिग्री सेल्सियस पर 1 साल तक) लगानेवाला में संग्रहीत किया गया। अपर्याप्त पचा जड़ सामग्री पानी में डालकर रखना मुश्किल है और लंबे समय तक चलने थकावट का एक परिणाम के रूप में तैयार करने के कुल समय में वृद्धि होगी। इसके अलावा, मेटाफ़ेज़ गुणसूत्रों मछली प्रयोग के दौरान जांच पैठ आगामी बाधा सकता है कि कोशिका द्रव्य में एम्बेडेड रहते हैं। दूसरी ओर ओवर-पच सामग्री गुणसूत्रों को खुद की संरचना, और नुकसान लक्ष्य डी.एन. प्रभावित कर सकते हैंमछली के विश्लेषण के लिए एक।

तैयारी के सुधार के लिए एक अतिरिक्त कारक लगानेवाला की दूसरी ड्रॉप (: 1, एसिटिक एसिड / इथेनॉल 3) का इस्तेमाल होता है। इस मिश्रण में एसिटिक एसिड के उच्च एकाग्रता कोशिका द्रव्य के पाचन उत्तेजित करता है और बड़े गुणसूत्रों के साथ प्रजातियों में फैल गुणसूत्र को बढ़ावा देता है। कोशिका द्रव्य कमी भी स्लाइड्स पर गुणसूत्रों के स्थिरीकरण के बाद जगह ले सकते हैं। इस प्रयोजन के लिए गुणसूत्र फैलता ले जाने खुर्दबीन स्लाइड 2-10 मिनट कोशिका द्रव्य के स्तर पर निर्भर करता है के लिए आरटी पर 45% एसिटिक एसिड में incubated जा सकता है। गुणसूत्र फैलता की गुणवत्ता की जांच किसी भी अनुपूरक धुंधला (जैसे, 1% aceto-Carmin) के बिना एक चरण विपरीत माइक्रोस्कोप के साथ प्रदर्शन किया गया था। आम तौर पर उच्च गुणवत्ता वाले गुणसूत्र फैलता युक्त 25 से अधिक स्लाइड उपरोक्त विधि का उपयोग कर 20 जड़ों से प्राप्त किया जा सकता है।

5 एस rDNA, [सीटीटी] 10 का उपयोग कर mitotic मेटाफ़ेज़ गुणसूत्रों पर मछली प्रयोगों का परिणाम है, और 6 कश्मीरख लंबे एकल कॉपी जांच (FPct_40752) अलग और (चित्रा 2) ऊपर वर्णित सभी प्रजातियों के लिए एक उच्च गुणवत्ता के थे। इस दृष्टिकोण का स्पष्ट लाभ सफल मछली के विश्लेषण के लिए एक आदर्श शर्त के रूप में सेवारत अच्छी तरह से फैला है, क्षतिग्रस्त और कई मेटाफ़ेज़ गुणसूत्रों हैं। यह दो महीने के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर सेल निलंबन स्टोर करने के लिए और गुणसूत्र मछली प्रयोग के दिन पर फैलता है तैयार करने के लिए संभव है। हम इस तरह के गुणसूत्रों पर संकरण संकेतों की गुणवत्ता हौसले से तैयार मेटाफ़ेज़ फैलता की तुलना में कम हो जाता है कि मनाया हालांकि हौसले तैयार स्लाइड भी, 96% इथेनॉल में -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहित किया जा सकता है।

तेज हवा शुष्क छोड़ने तकनीक द्वारा तैयार क्रोमोजोम फैलता मछली के लिए उपयुक्त थे और एक बार की संख्या reproduced किया गया। मछली के साथ इस गुणसूत्र तैयारी विधि का संयोजन व्यापक रूप से karyotyping 11, CHROMOS के लिए, उदाहरण के लिए, पौधों में जीनोम संगठन का पता लगाने के लिए आवेदन किया जा सकता हैसिंथेटिक अध्ययन में, और शारीरिक और आनुवंशिक नक्शे 13 के एकीकरण के लिए Omal मानचित्रण 12।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hot Plate MEDAX GmbH 12603
Cellulase R10 Duchefa C8001
Cellulase  CalBioChem 219466
Pectolyase Sigma P3026
Cytohelicase Sigma C8274
Texas Red-12-dUTP Invitrogen C3176 direct fluorochrome 
Fluor488-5-dUTP Invitrogen C11397 direct fluorochrome 
Fluorecsence microscope Olympus BX61 BX61
CCD camera Orca ER, Hamamatsu C10600
4’,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)  Vector Laboratories H-1200 fluorecsent dye

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References

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